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瞬時(shí)轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的區(qū)別
哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)具有促使蛋白正確折疊和實(shí)現(xiàn)復(fù)雜修飾的功能，表達(dá)的蛋白更近天然狀態(tài)，能夠運(yùn)用于制藥等活性要求高的領(lǐng)域。利用哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)蛋白通常有兩種方式：瞬時(shí)轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。那么瞬時(shí)轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的區(qū)別是什么呢？讓我們一起來看看吧！
一、瞬時(shí)轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)原理的異同
瞬時(shí)轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染都是將目的基因轉(zhuǎn)染至特定哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)，進(jìn)而表達(dá)得到目的蛋白。不同的是瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的方式外源基因并沒有轉(zhuǎn)染到細(xì)胞的染色體上而是存在于游離的載體上，這樣可以在短時(shí)間內(nèi)獲得基因的表達(dá)產(chǎn)物，但是隨著細(xì)胞的不斷分裂增殖外源基因最終會(huì)丟失，無法繼續(xù)進(jìn)行重組蛋白的生產(chǎn)；而利用細(xì)胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染則會(huì)將外源基因轉(zhuǎn)染至細(xì)胞染色體上，目的基因不會(huì)隨著細(xì)胞傳代而消失，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株能夠長(zhǎng)期穩(wěn)定的生產(chǎn)目的蛋白。
二、實(shí)驗(yàn)操作的差別
1. 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染所用的質(zhì)粒是不同的，瞬轉(zhuǎn)的質(zhì)粒不需要帶有抗性，而用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒一定要帶有特定的抗性以便于后續(xù)的克隆株篩選。另外，兩者所用的培養(yǎng)基及實(shí)驗(yàn)試劑也有所區(qū)別。
2. 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的操作比構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞系的操作簡(jiǎn)單，構(gòu)建好質(zhì)粒后，經(jīng)過細(xì)胞復(fù)蘇、轉(zhuǎn)染、細(xì)胞培養(yǎng)、蛋白純化等步驟即可得到目的蛋白；而構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞系需要先將構(gòu)建好的質(zhì)粒線性化，再導(dǎo)入培養(yǎng)好的哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)，通過一定的轉(zhuǎn)染方式實(shí)現(xiàn)質(zhì)粒與細(xì)胞的融合，接著經(jīng)過細(xì)胞池篩選、單克隆篩選、細(xì)胞傳代培養(yǎng)等步驟才能得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系。對(duì)穩(wěn)定細(xì)胞系進(jìn)行培養(yǎng)能夠長(zhǎng)期穩(wěn)定的生產(chǎn)目的蛋白。
三、應(yīng)用場(chǎng)景
瞬時(shí)轉(zhuǎn)染表達(dá)和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染表達(dá)顯著的區(qū)別就是在時(shí)間上。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染在轉(zhuǎn)染后四天即能收獲細(xì)胞，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染一般用于基因產(chǎn)物的短期表達(dá)、蛋白質(zhì)的小規(guī)模合成。相對(duì)于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染表達(dá)適用于長(zhǎng)期的藥理學(xué)研究遺傳調(diào)控機(jī)制研究及大規(guī)模的蛋白質(zhì)合成，需要大量的周期，因此更費(fèi)力成本投入高。
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