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單克隆抗體的篩選方法

來源:蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司   2024年06月05日 15:10  

單克隆抗體(Monoclonal Antibody,簡稱mAb)是現(xiàn)代生物技術(shù)中的一種重要產(chǎn)品,廣泛應用于醫(yī)學、生物學、藥理學等領(lǐng)域。在過去的幾十年里,隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展,單克隆抗體的制備和應用取得了不錯的成績。本文將介紹單克隆抗體的篩選方法,以幫助讀者了解這一領(lǐng)域的基本知識,并探討如何利用先進技術(shù)提高篩選效率。

一、單克隆抗體的制備過程

單克隆抗體的制備過程主要包括以下幾個步驟:

1.免疫:將目標抗原(如病毒、細菌、癌細胞等)注入實驗動物(如小鼠、大鼠、兔等)體內(nèi),使其免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗體。

2.細胞融合:然后,從免疫動物的脾臟中提取B淋巴細胞,并將其與骨髓瘤細胞進行細胞融合,形成雜交瘤細胞。

3.篩選:接下來,通過特定的篩選方法,從雜交瘤細胞中篩選出能產(chǎn)生目標抗體的單克隆細胞。

4.擴增:將篩選出的單克隆細胞進行體外培養(yǎng),擴增其數(shù)量,以獲得大量的單克隆抗體。


單細胞組學技術(shù)


二、單克隆抗體的篩選方法

在單克隆抗體的制備過程中,篩選方法是非常關(guān)鍵的環(huán)節(jié)。目前,常見的篩選方法主要有以下幾種:

1.酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA):ELISA是一種基于抗原-抗體反應的檢測方法,廣泛應用于單克隆抗體的篩選。其原理是將抗原固定在固體載體上,然后加入抗體,通過檢測抗體與抗原的結(jié)合情況,從而篩選出能產(chǎn)生目標抗體的單克隆細胞。

2.免疫熒光法:免疫熒光法是將熒光物質(zhì)標記在抗體上,通過檢測熒光信號來篩選單克隆細胞。該方法具有操作簡便、結(jié)果直觀等優(yōu)點。

3.放射性免疫測定法:放射性免疫測定法是將放射性同位素標記在抗原或抗體上,通過檢測放射性信號來篩選單克隆細胞。該方法具有較高的靈敏度和特異性,但存在放射性污染的風險。

4.流式細胞術(shù)(FACS):FACS是一種基于細胞生物學特性的篩選方法,通過檢測細胞表面的特定抗原或抗體,從而篩選出能產(chǎn)生目標抗體的單克隆細胞。該方法具有高通量、高靈敏度等優(yōu)點。

5.分子生物學方法:隨著分子生物學技術(shù)的發(fā)展,一些基于基因和蛋白水平的篩選方法也被應用于單克隆抗體的篩選。例如,通過基因克隆、表達和純化抗體片段,然后進行功能篩選,從而獲得具有特定活性的單克隆抗體。


單克隆抗體生產(chǎn)

三、利用實驗設(shè)備等技術(shù)提高篩選效率

在有限的時間內(nèi)篩選和選擇轉(zhuǎn)染群體中高生產(chǎn)率和可擴展的克隆體仍然是一項重大挑戰(zhàn)。為了提高篩選效率,研究者們開發(fā)了多種先進技術(shù)。其中,利用具有全過程參數(shù)可控制性的小型化高吞吐量生物反應器模擬大型生物反應器環(huán)境,有助于在早期階段確定合適的生產(chǎn)克隆。這種方法可以在更短的時間內(nèi)對更多的克隆進行評估,從而加快篩選進程。

全自動單克隆圖像分析(AEC)系統(tǒng),如STUDIUS™,整合了整個Solentim生態(tài)系統(tǒng),簡化了工作流程,實現(xiàn)了高質(zhì)量數(shù)據(jù)管理。這種系統(tǒng)可以實現(xiàn)自動化,通量高,減少操作時間,并且與第三方機械臂輕松整合。自動克隆性報告為IND申報提供了更自信的數(shù)據(jù)支持,匯合度精度掃描誤差率在5%以內(nèi),大大提高了篩選的準確性和效率。此外,這種自動化系統(tǒng)設(shè)置易于使用,減少了學習時間,使得研究人員能夠更快地掌握篩選技術(shù)。

總之,單克隆抗體的篩選方法多種多樣,每種方法都有其優(yōu)缺點。在實際應用中,研究者需要根據(jù)實驗目的和條件,選擇合適的篩選方法。通過利用一些實驗設(shè)備或技術(shù),如小型化高吞吐量生物反應器和全自動單克隆圖像分析系統(tǒng),篩選效率將得到較大提升,加速單克隆抗體的研發(fā)和應用。


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