1. 適用鍵合相 反相色譜柱鍵合相包括:C18、C8、C4、C1、Phenyl、PFP、aQ 等。
2. 柱體積 色譜柱的柱體積可以通過以下公式估算: V=0.68 π (d/2)2 L·10-3 V 為色譜柱柱體積(mL),d 為色譜柱內(nèi)徑(mm),L 為色譜 柱長度(mm)。
3. 色譜柱柱效測試與保存 反相色譜柱出廠時都經(jīng)過柱效測試,所用化合物為茶堿、鄰二 甲苯、對硝基苯胺、苯甲酸甲酯和二甲苯,如有不同,以柱效 報告為準(zhǔn)。 在條件允許情況下,請對新色譜柱進(jìn)行柱效測試。 反相色譜柱出廠的保存溶劑詳見柱盒或 COA 報告。
4. 溫度 所有硅膠基質(zhì)色譜柱使用溫度應(yīng)低于 60℃。
5、 樣品制備 最好將樣品溶解在流動相或極性相近的溶劑中。如果使用梯度 洗脫,則需要將樣品溶解在初始流動相或極性相近的溶劑中。 樣品溶液不應(yīng)含有任何顆粒物,最好使用 0.45 μm 或更小孔徑 的濾膜過濾。同時建議在刪除空格色譜系統(tǒng)中使用在線過濾器。 樣品溶液如果使用強(qiáng)洗脫溶劑(例如,流動相為水,樣品溶劑 為甲醇),為達(dá)到較好峰形,需要降低進(jìn)樣量(以 250×4.6 mm 規(guī)格為例,小于 10 μL)。
6、 流動相 所有流動相,特別是含有緩沖鹽的流動相,最好實(shí)驗(yàn)當(dāng)天配制; 如果使用了早前配制的流動相,請確保流動相 pH 值是否變化, 并確保流動相沒有發(fā)霉長菌。 流動相的 pH 值取決于您的應(yīng)用和色譜柱填料類型。此說明書 上所列的所有的色譜柱上都建議使用 pH 范圍為 2~8 之間的流 動相,如果需要使用 pH 更高(1.5-10)的流動相的硅膠柱, 請選用 Acclaim PolarAdvantage II (PA2)、Acclaim AMG C18、 Accucore Polar Premium 等色譜柱,具體使用情況請咨詢工程 師或者參考該柱子的說明書。 如實(shí)驗(yàn)方法中使用高比例的水(>95%)作為流動相條件,強(qiáng)烈 建議使用耐水鍵合相,例如 Accucore aQ、Hypersil GOLD aQ、 Aquasil C18、Syncronis aQ 等色譜柱,保證重現(xiàn)性。 所有流動相都需使用 0.22 μm 濾膜過濾。
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