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描述fei冷凍透射電鏡的樣品制備過(guò)程

來(lái)源:賽默飛電子顯微鏡   2024年07月11日 10:50  
  fei冷凍透射電鏡是一種用于研究生物大分子、細(xì)胞器、病毒和蛋白質(zhì)等生物樣品的顯微技術(shù)。樣品被快速冷凍并保持在低溫下,以保持其天然狀態(tài)和水分。這種方法可以提供高分辨率的圖像,同時(shí)避免了傳統(tǒng)化學(xué)固定和染色方法可能引起的結(jié)構(gòu)變化。以下是fei冷凍透射電鏡樣品制備的詳細(xì)過(guò)程:
 
  1、樣品準(zhǔn)備:首先,需要準(zhǔn)備一個(gè)適當(dāng)濃度的生物樣品。對(duì)于蛋白質(zhì)或病毒樣品,通常需要調(diào)整到適當(dāng)?shù)木彌_液中,并確保樣品的純度和濃度適合觀察。對(duì)于細(xì)胞樣品,可能需要進(jìn)行輕微的處理,如低滲處理,以便更好地觀察細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)。
 
  2、樣品裝載:使用特殊的網(wǎng)格,這些網(wǎng)格上覆蓋有一層薄的碳膜或孔洞薄膜。將一小滴樣品滴在網(wǎng)格上,使其形成一個(gè)薄薄的液體層。
 
  3、快速冷凍:這是最關(guān)鍵的步驟,需要迅速將樣品冷卻到液氮溫度以下,以防止冰晶的形成。這通常通過(guò)將帶有樣品的網(wǎng)格迅速浸入液氮冷卻的液態(tài)乙烷或丙烷中來(lái)實(shí)現(xiàn)。
 
  4、轉(zhuǎn)移和裝載:冷凍后的樣品需要轉(zhuǎn)移到樣品艙中,這個(gè)過(guò)程要在低溫條件下進(jìn)行,以防止樣品升溫和結(jié)霜。使用特制的鑷子和工具在液氮環(huán)境下操作,將樣品網(wǎng)格轉(zhuǎn)移到顯微鏡的冷臺(tái)上。
 
  5、觀察和成像:在fei冷凍透射電鏡中,樣品保持在低溫下,使用透射電子束進(jìn)行成像。由于樣品是冷凍的,可以使用較低的電子劑量來(lái)減少輻射損傷。通過(guò)調(diào)整焦距和放大倍數(shù),可以獲得不同分辨率的圖像。
 
  6、數(shù)據(jù)記錄和分析:獲得的圖像可以通過(guò)數(shù)字相機(jī)記錄下來(lái),并進(jìn)行后續(xù)的圖像處理和分析。這包括對(duì)比度增強(qiáng)、噪聲減少和圖像重建等步驟。
 
  在整個(gè)fei冷凍透射電鏡樣品制備過(guò)程中,關(guān)鍵是要盡可能保持樣品的自然狀態(tài),避免任何可能導(dǎo)致結(jié)構(gòu)變化的處理步驟。此外,操作者需要具備一定的技巧和經(jīng)驗(yàn),以確保樣品的正確冷凍和轉(zhuǎn)移。

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