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細胞復蘇實驗的操作步驟與注意事項

來源:天津益元利康生物科技有限公司   2024年08月08日 14:46  
  細胞復蘇是指將凍存在液氮或者-70℃冰箱中的細胞解凍之后重新培養(yǎng),細胞恢復生長的過程。當恢復到常溫狀態(tài)時,細胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)保持正常,生化反即刻恢復。細胞復蘇過程升溫要快,原則是慢凍快融,防止在解凍過程中水分進入細胞,形成冰晶,影響細胞存活。下面讓我們一起來看看細胞復蘇實驗的操作步驟與注意事項吧!
 
  一、操作步驟
 
  1.將10ml移液管、移液槍、1ml槍頭、50ml離心管、T25培養(yǎng)瓶、酒精燈、廢液缸等物品放入超凈工作臺,紫外燈照射30min后再通風30min;
 
  2.預熱培養(yǎng)基;
 
  3.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺;
 
  4.將凍存細胞從液氮罐中取出;
 
  5.放入一次性手套于37℃水浴鍋中快速晃動使其融化;
 
  6.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺;
 
  7.吸取9ml培養(yǎng)基到50ml離心管中;
 
  8.用1ml槍頭吸取解凍的細胞懸液于離心管中;
 
  9.1000r/min,離心5min;
 
  10.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺;
 
  11.吸棄上清液;
 
  12.吸取1ml培養(yǎng)基重懸細胞,將細胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶內(nèi),補加適量培養(yǎng)基,輕輕晃動培養(yǎng)瓶使細胞分布均勻,并做好標記;
 
  13.在顯微鏡下觀察復蘇的細胞密度及狀態(tài);
 
  14.將細胞放回二氧化碳培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
 
  二、注意事項
 
  1.從液氮罐中取出細胞時,應做好個人防護以免凍傷;
 
  2.凍存細胞取出后,如不能立即放入水浴鍋中融化,需將其放在干冰上保存轉(zhuǎn)移;
 
  3.細胞水浴解凍時間以1min內(nèi)為宜,做到慢凍速融;
 
  4.已解凍的細胞避免長時間常溫存放,需盡快離心去除DMSO;
 
  5.剛復蘇的細胞貼壁尚不牢固,24h內(nèi)不要頻繁觀察和換液;
 
  6.將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱,并將瓶蓋旋松,以便進行充分的氣體交換(如使用透氣性瓶蓋,則無需旋松瓶蓋)。
 
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