精品国产亚洲国产亚洲,久热中文在线观看精品视频,成人三级av黄色按摩,亚洲AV无码乱码国产麻豆

產(chǎn)品推薦:氣相|液相|光譜|質(zhì)譜|電化學|元素分析|水分測定儀|樣品前處理|試驗機|培養(yǎng)箱


化工儀器網(wǎng)>技術(shù)中心>解決方案>正文

歡迎聯(lián)系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

【案例分享】利用激光顯微切割(LMD)在空間背景下分離神經(jīng)元

來源:徠卡顯微系統(tǒng)(上海)貿(mào)易有限公司   2024年09月23日 16:22  

通過利用個體多巴胺能(DA)神經(jīng)元空間轉(zhuǎn)錄組學解決帕金森病之謎

圖片

阿爾茨海默病之后,帕金森病是第二常見的進行性神經(jīng)退行性疾病。在shou發(fā)癥狀出現(xiàn)之前,中腦中高達70%的多巴胺釋放神經(jīng)元已經(jīng)死亡。本文描述了如何使用現(xiàn)代激光顯微切割(LMD)方法幫助解決帕金森病之謎。研究涉及在空間背景下分離和分析神經(jīng)元。這些細胞來自帕金森病患者的死后黑質(zhì)組織樣本,以便深入了解該病的分子機制。



帕金森病是什么?

帕金森癥(PD)是一種神經(jīng)退行性疾病,會降低受影響個體的生活質(zhì)量。著名運動員muhanmodei·阿里和演員邁克爾·J·??怂咕褪腔加谢蛟?jīng)患有帕金森癥的著名例子。該病的成因多種多樣,例如遺傳(邁克爾·J·??怂沟那闆r)或物理影響(muhanmodei·阿里的情況)。到目前為止,治療該病主要側(cè)重于癥狀的緩解,主要通過服用 L-DOPA(多巴胺前體)藥物來實現(xiàn)。


該病的根本原因是中腦或黑質(zhì)(SN,黑色物質(zhì))中一群多巴胺能(DA)神經(jīng)元的選擇性死亡[1,2]。在超過60%的多巴胺能神經(jīng)元損失后,才可見到第一個表型。因此,基于年齡和性別匹配的對照,對死后帕金森病患者的中腦組織進行比較,就像是拿蘋果和香蕉進行比較。因此,必須逐一分析黑質(zhì)致密部中幸存的多巴胺能神經(jīng)元,以發(fā)現(xiàn)這些特定多巴胺產(chǎn)生細胞之間的差異。


關(guān)于該病的起源有多種理論。因此,帕金森病可以比作一個拼圖。已經(jīng)找到了許多碎片,并且已經(jīng)組合了一些碎片,但仍然沒有人知道整個畫面是什么樣子。一些碎片的重要性尚未確定,也沒有人知道在能夠清楚地了解帕金森病之前,還需要找到多少碎片才能呈現(xiàn)完整的畫面。




空間背景下的

多巴胺能神經(jīng)元分離與帕金森病研究

使用的典型工作流程和實驗程序

由于帕金森病通常在較晚的年齡出現(xiàn),因此用于研究帕金森病的動物模型相當罕見,因此,嚙齒類(小鼠和大鼠)模型沒有與人類相似的明確表型。在猴子中進行的研究,其中帕金森病可以通過藥物引入,即使在較年輕的動物中,也是昂貴的,并且需要許多研究人員無法獲得的特殊條件。除了這些挑戰(zhàn)之外,單個神經(jīng)元的活性通常通過電生理學來研究。這種方法需要活腦組織切片,而這是無法從人身上獲取的。因此,需要一種不同的方法來選擇性分析多巴胺能(DA)神經(jīng)元。出于這個原因,激光顯微切割(LMD)方法發(fā)揮了作用[3]

圖片

圖1:用于帕金森病研究的實驗流程圖:從人類死后帕金森病大腦和對照組個體的黑質(zhì)(SN)DA神經(jīng)元中,通過紫外線激光顯微切割(UV-LMD)和定量RT-PCR(實時聚合酶鏈式反應(yīng))基因表達分析進行單個神經(jīng)元分析的協(xié)議。




數(shù)據(jù)和結(jié)果的分析與理解

通過將使用針進行修補以提取內(nèi)容進行下游分析的單個神經(jīng)元的分子生物學結(jié)果,與激光顯微切割(LMD)解剖的神經(jīng)元的結(jié)果進行比較,可以證明這兩種收集方法的結(jié)果是可比的。此外,LMD允許研究人員從死后人類中腦收集單個神經(jīng)元,更具體地說,是從黑質(zhì)(SN)中收集,因為DA神經(jīng)元由于含有神經(jīng)黑色素而呈黑色,因此很容易識別。使用LMD,可以分析來自死后帕金森病患者的單個存活DA神經(jīng)元和匹配對照組的表達模式,目的是找到兩組在分子水平上的差異。這種調(diào)查有助于理解帕金森病的病因或后果。





研究黑質(zhì)中多巴胺能神經(jīng)元時面臨的挑戰(zhàn)

分析不同的死后標本就像是在帕金森病特定階段的“快照”。這些“快照”可以相互比較,但這些標本不能用于檢測改變的基因表達是疾病的結(jié)果還是原因。需要進一步研究這個問題。此外,考慮到帕金森病患者的基因表達僅在釋放多巴胺的神經(jīng)元中發(fā)生改變,那么對于帕金森病謎題的研究,只應(yīng)分析這些相關(guān)的細胞類型。如果不小心將其他細胞類型添加到分析物中,它們會降低結(jié)果的質(zhì)量。




激光顯微切割

激光顯微切割(LMD),也稱為激光捕獲顯微切割(LCM),是一種用于從各種組織標本中在空間背景下隔離特定單個細胞或整個組織區(qū)域的無接觸、無污染的方法。原始組織的厚度、質(zhì)地和制備相對不重要。


然后,可以使用進一步的分子生物學方法對切割下來的組織進行分析,如下一代測序(NGS),包括RNA測序、定量聚合酶鏈式反應(yīng)(qPCR)、實時qPCR、蛋白質(zhì)組學、代謝組學、脂質(zhì)組學和多組學技術(shù)。LMD現(xiàn)在被廣泛應(yīng)用于許多研究領(lǐng)域,例如病理學、神經(jīng)學、癌癥、植物分析、法醫(yī)學和氣候?qū)W。此外,LMD還用于細胞培養(yǎng)的操作或蓋玻片的微雕刻。


LMD對于基因組學(DNA)、轉(zhuǎn)錄組學(RNA)和蛋白質(zhì)組學(蛋白質(zhì))工作流程的優(yōu)化非常有用,因為它允許在視覺控制下從組織中精確提取和收集純凈的起始材料以供分析。




使用LMD的結(jié)果

與完整的組織檢查結(jié)果相比,對單個細胞的分析經(jīng)常顯示出不同的結(jié)果[3-6]。研究表明,帕金森病患者的組織中某些microRNA的表達發(fā)生了變化


當同時檢查微切割的細胞時,發(fā)現(xiàn)microRNA的表達在細胞水平上并沒有變化。這種組織偽影是借助激光顯微切割檢測到的。


使用LMD系統(tǒng)可以實現(xiàn)單個細胞的無接觸切割,或者在必要時,實現(xiàn)更大面積組織的切割。切割下來的材料被捕獲在試管帽中,可以立即進行處理。請參考下面的圖2、圖3和圖4。

圖片

圖2:左圖:經(jīng)過對10個單個DA神經(jīng)元進行紫外線激光顯微切割(UV-LMD)后的鼠腦中腦冠狀切面,用甲酚紫染色。中圖:從上圖中選擇一個神經(jīng)元進行LMD。右圖:在單個神經(jīng)元切片(左)和蓋帽對照(右)上進行UV-LMD后,顯示了成功的隔離。

圖片

圖3:通過LMD和mRNA表達分析從人類PD(帕金森病)和對照死后大腦中分離出的單個黑質(zhì)DA神經(jīng)元。通過LMD從PD(A)和對照組大腦(B)的甲酚紫染色水平中腦冷凍切片中分離出神經(jīng)黑色素陽性[NM(+)]神經(jīng)元群。

圖片

圖4:LMD前后的甲酚紫染色小鼠大腦冷凍切片(A)和(B)[7]。




帕金森病研究的未來挑戰(zhàn)

目前,沒有用于早期診斷帕金森病的測試,而且該疾病存在許多變異。此外,還有一些具有類似癥狀的疾病。因此,一定比例的帕金森病病例被誤診或根本沒有被診斷出來。


成功治療帕金森病的前提是有效的早期診斷。如果能夠在神經(jīng)元剛剛開始退化的初期階段診斷出疾病,就有可能防止神經(jīng)元進行性退化并wan全阻止疾病的發(fā)展。


在血液或腦脊液中識別生物標志物是目前研究的主要焦點。有些基因不僅在大腦中表達,而且在所有細胞中普遍表達。如果帕金森病病例中多巴胺能神經(jīng)元的這些基因表達發(fā)生變化,就可以更容易地檢查可接近的組織以用于診斷目的。


也許在不久的將來,激光顯微切割(LMD)與人工智能(AI)甚至質(zhì)譜技術(shù)的結(jié)合,可以為更好地理解帕金森病帶來進一步的突破。


參考文獻:(上下滑動查看更多)

1.Schlaudraff, F., Gründemann, J., Fauler, M., Dragecivic, E., Hardy, J., Liss, B., Orchestrated increase of dopamine and PARK mRNAs but not miR-133b in dopamine neurons in Parkinson’s disease, Neurobiology of Aging (2014) vol. 35, iss. 10, pp. 2302-2315, DOI: 10.1016/j.neurobiolaging.2014.03.016.

2.Kurz, A., Double, K.L., Lastres-Becker, I., Tozzi, A., Tantucci, M., Bockhart, V., Bonin, M., García-Arencibia, M., Number, S., Schlaudraff, F., Liss, B., Fernández-Ruiz, J., Gerlach, M., Wüllner, U., Lüddens, H., Calabresi, P., Auburger, G., Gispert, S., A53T-alpha-Synuclein Overexpression Impairs Dopamine Signaling and Striatal Synaptic Plasticity in Old Mice, PLoS ONE (2010) vol. 5, iss. 7, e11464, DOI: 10.1371/journal.pone.0011464.

3.Gründemann, J., Schlaudraff, F., Liss, B., UV-laser microdissection and mRNA expression analysis of individual neurons from postmortem Parkinson's disease brains, Ch. 30 in Laser Capture Microdissection: Methods and Protocols (Methods in Molecular Biology series, Springer, 2011) vol. 755, pp. 363-374.

4.Gründemann, J., Schlaudraff, F., Haeckel, O., Liss, B., Elevated alpha-synuclein mRNA levels in individual UV-laser-microdissected dopaminergic substantia nigra neurons in idiopathic Parkinson's disease, Nucleic Acids Research (2008) vol. 36, iss. 7, e38, DOI: 10.1093/nar/gkn084.

5.Begus-Nahrmann, Y., Lechel, A., Obenauf, A.C., Nalapareddy, K., Peit, E., Hoffmann, E., Schlaudraff, F., Liss, B., Schirmacher, P., Kestler, H., Danenberg, E., Barker, N., Clevers, H., Speicher, MR., Rudolph, K.L., p53 deletion impairs clearance of chromosomal-instable stem cells in aging telomere-dysfunctional mice, Nature Genetics (2009) vol. 41, iss. 10, pp. 1138–1143, DOI: 10.1038/ng.426.

6.Aguado, C., Colon, J., Ciruela, F., Schlaudraff, F., Cabanero, M.J., Watanabe, M., Liss, B., Wickman, K., Lujan, R., Cell type specific subunit composition of G-protein-gated potassium channels in the cerebellum, J. Neurochemistry (2008) vol. 105, iss. 2, pp. 497–511, DOI: 10.1111/j.1471-4159.2007.05153.x.

7.Brain Research: Correlation of sample morphology and gene expression, Flyer (2016) Leica Microsystems. 


相關(guān)產(chǎn)品

圖片

Leica LMD6 & LMD7激光顯微切割系統(tǒng)







免責聲明

  • 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責任。
  • 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權(quán)行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時,必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負版權(quán)等法律責任。
  • 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
企業(yè)未開通此功能
詳詢客服 : 0571-87858618
大连市| 恭城| 黔东| 台南市| 高碑店市| 泉州市| 海林市| 湘潭市| 望江县| 会宁县| 葫芦岛市| 锦屏县| 乌兰浩特市| 麻阳| 曲水县| 紫云| 黎城县| 南郑县| 宁陕县| 仪陇县| 永泰县| 赞皇县| 楚雄市| 彩票| 南开区| 巧家县| 甘德县| 固镇县| 修水县| 大悟县| 通渭县| 长岛县| 山西省| 石楼县| 九龙城区| 吴旗县| 吉安县| 涟水县| 荔波县| 长岛县| 原平市|