【包裝規(guī)格】

貨號：WLRE8208KIT

規(guī)格：48 份/盒

【原理概述】

本試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴(kuò)增技術(shù)：在常溫恒溫下，特殊修飾的反轉(zhuǎn)錄酶利用特異性引物 DNA 和模板 RNA 合成cDNA 鏈，反應(yīng)體系中的重組酶、單鏈 DNA結(jié)合蛋白和 DNA 聚合酶以新合成的 cDNA鏈為模板進(jìn)行快速核酸擴(kuò)增反應(yīng)。本試劑盒在 42 oC 下，依賴核酸外切酶的作用，加入根據(jù)模板設(shè)計(jì)的特異的分子探針，使用熒光監(jiān)測設(shè)備能實(shí)現(xiàn)對目標(biāo)片段擴(kuò)增過程的實(shí)時監(jiān)控。適用于實(shí)驗(yàn)室級別的 RNA 擴(kuò)增以及其他檢測用途的 RNA 擴(kuò)增使用。

【產(chǎn)品特點(diǎn)】

本試劑盒具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、反應(yīng)時間短（僅需 20 min）等優(yōu)點(diǎn)，反應(yīng)組分為干粉狀態(tài)，操作簡便，易于保存。

可適用于各種品牌的熒光定量 PCR 儀，恒溫?zé)晒鈹U(kuò)增儀器等熒光檢測設(shè)備。

【引物設(shè)計(jì)】

建議使用長度在 30-35 bp 的引物，引物過短會影響擴(kuò)增速度和檢測靈敏度；引物設(shè)計(jì)避免形成二級結(jié)構(gòu)而影響擴(kuò)增；擴(kuò)增子長度建議在 150-500 bp。

【熒光探針設(shè)計(jì)】

探針序列不與特異性引物識別位點(diǎn)重疊，長度為 46-52 nt，序列避免回文序列、內(nèi)部二級結(jié)構(gòu)和連續(xù)的重復(fù)堿基。探針共有四個修飾位點(diǎn)：距離 5’端的≈35 nt 的中部位置標(biāo)記一個 dSpacer（四氫呋喃，THF），作為核酸外切酶的識別位點(diǎn)；THF 位點(diǎn)的上游標(biāo)記一個熒光基團(tuán)，下游標(biāo)記一個粹滅基團(tuán)，兩個基團(tuán)的間距為2-4 nt；THF 距離3’末端≥15 nt，并且 3’末端標(biāo)記一個修飾基團(tuán)，例如胺基、磷酸基團(tuán)或 C3-Spacer。

【試劑盒組成】

注：考慮到核酸降解問題，RNA 系列產(chǎn)品不提供正對照模板和引物探針。

【試劑盒儲存】

1．運(yùn)輸溫度：≤20oC的恒溫環(huán)境；

2．儲存條件：儲存溫度≤-20°C（±5°C）恒溫環(huán)境，避光保存，避免重壓、反復(fù)凍融；

3．產(chǎn)品有效期：14個月；

4．生產(chǎn)日期見外包裝。

【注意事項(xiàng)】

1. 由于試劑盒靈敏度非常高，在進(jìn)行反應(yīng)時請注意避免核酸污染，并設(shè)置空白對照；

2．使用時請取出實(shí)驗(yàn)所需的 MIRA 反應(yīng)單元的數(shù)量，剩余部分請置于存儲條件下。

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