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根據流動相和固定相相對極性不同，液相色譜分為正相色譜和反相色譜。流動相極性大于固定相極性的情況，稱為反相色譜。非極性鍵合相色譜可作反相色譜。在現(xiàn)代液相色譜中應用廣泛，現(xiàn)代液相色譜分析工作的70%以上是在非極性鍵合固定相上進行的。
指利用非極性的反相介質為固定相，極性有機溶劑的水溶液為流動相，根據溶質極性(疏水性)的差別進行溶質分離與純化的洗脫色譜法。與HIC一樣，RPC中溶質也通過疏水性相互作用分配于固定相表面，但是，RPC固定相表面被非極性基團所覆蓋，表現(xiàn)出強烈的疏水性。
RPC固定相大多是硅膠表面鍵合疏水基團，基于樣品中的不同組分和疏水基團之間疏水作用的不同而分離。在生物大分子分離中，多采用離子強度較低的酸性水溶液，添加一定量乙腈、異丙醇或甲醇等與水互溶的有機溶劑作為流動相。
反相介質性能穩(wěn)定。分離效率高，可分離蛋白質、肽、氨基酸、核酸、甾類、脂類、脂肪酸、糖類、植物堿等含有非極性基團的各種物質。
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