入/核/電/轉(zhuǎn)Lonza Nucleofector

超高引用值得信賴

非病毒轉(zhuǎn)染

Nucleofector電轉(zhuǎn)技術(shù)

細(xì)胞轉(zhuǎn)染有許多不同的方式，常用于實(shí)驗(yàn)室的就是脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染、病毒轉(zhuǎn)染以及電穿孔法。

傳統(tǒng)的電穿孔技術(shù)需要摸索步驟進(jìn)行優(yōu)化，轉(zhuǎn)染位置為胞質(zhì)，細(xì)胞毒性大，轉(zhuǎn)染效率難以得到保證。但Lonza公司對電穿孔技術(shù)進(jìn)行了優(yōu)化，通過配合高效率的細(xì)胞轉(zhuǎn)染液、預(yù)置的優(yōu)化好的轉(zhuǎn)染程序，直接將外源基因?qū)肽繕?biāo)細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)更高轉(zhuǎn)染效率、更高細(xì)胞存活率，最快在轉(zhuǎn)染2小時后就能觀察到轉(zhuǎn)染基因的蛋白表達(dá)。

原理與優(yōu)勢

Nucleofector技術(shù)原理：高效的非病毒的DNA轉(zhuǎn)運(yùn)，適用于原代細(xì)胞或是細(xì)胞系，可直接轉(zhuǎn)運(yùn)入細(xì)胞核。

主要優(yōu)勢：

· 基因轉(zhuǎn)染效率高

· 轉(zhuǎn)染與細(xì)胞分裂無關(guān)

· 可實(shí)現(xiàn)非分裂細(xì)胞的轉(zhuǎn)染，如神經(jīng)元細(xì)胞

· 更快的基因表達(dá)

· 通用性：可轉(zhuǎn)染質(zhì)粒DNA，DNA單鏈，mRNA或是siRNA，可適用于原代細(xì)胞或是細(xì)胞系。

不同轉(zhuǎn)染模塊

Core Unit：核心模塊，控制系統(tǒng)，能夠加載程序，實(shí)現(xiàn)細(xì)胞轉(zhuǎn)染功能。

X Unit：能夠?qū)崿F(xiàn)懸浮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染，可以以20ul，100ul的體系進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

Y Unit：能夠?qū)崿F(xiàn)貼壁細(xì)胞的轉(zhuǎn)染，可直接在24孔板內(nèi)進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

96-well Unit：可在96孔板內(nèi)進(jìn)行檢測，可應(yīng)用于原代細(xì)胞以及難轉(zhuǎn)染細(xì)胞。

實(shí)驗(yàn)步驟簡單

Step 1：將目標(biāo)細(xì)胞從培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中收集起來。

Step 2：將細(xì)胞與轉(zhuǎn)染試劑、需轉(zhuǎn)入的物質(zhì)（DNA或siRNA）混勻，并轉(zhuǎn)入電極杯中。

Step 3：選擇合適的程序，將電極杯或電極條插入儀器中，按下Start按鈕。

Step 4：用培養(yǎng)基沖洗，將細(xì)胞沖洗下來

Step 5：將沖洗后的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿中，在一定時間后即可檢測轉(zhuǎn)染效率。

基因表達(dá)快速

TMR標(biāo)記的DNA表達(dá)eGFP的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染新生兒皮膚成纖維細(xì)胞（NHDF-neo)，兩小時后用 3.5%PFA固定，共聚焦顯微鏡可觀察到GFP蛋白在細(xì)胞核內(nèi)表達(dá)。

05

應(yīng)用領(lǐng)域多樣

免疫、腫瘤、代謝、神經(jīng)等研究領(lǐng)域的不同細(xì)胞，難以進(jìn)行轉(zhuǎn)染的細(xì)胞、無法分裂的細(xì)胞，都可以實(shí)施轉(zhuǎn)染。

06提供多種工具

從轉(zhuǎn)染方法到細(xì)胞培養(yǎng)知識，不同的轉(zhuǎn)染細(xì)胞種類，適用的不同轉(zhuǎn)染方法，都能在Lonza找到答案。