細(xì)胞老化的形態(tài)和分子生物學(xué)變化

1、顯微鏡下觀察，老化的細(xì)胞通常會(huì)在細(xì)胞內(nèi)部出現(xiàn)空泡（可能是凋亡小體）。但是，需要區(qū)分的是，部分細(xì)胞本身會(huì)有少量空泡，對(duì)于這些細(xì)胞，要每天觀察，注意細(xì)胞空泡是否增多。

2、顯微鏡下，也可能會(huì)觀察到更多的黑點(diǎn)，大多沿細(xì)胞周邊排布，細(xì)胞內(nèi)部也可能會(huì)出現(xiàn)一些，但相對(duì)周邊為少。

3、老化以后的細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)立體感慢慢消失，開(kāi)始成扁平狀，這是因?yàn)榧?xì)胞的折光性變差，顯微鏡下可以直觀地觀察到細(xì)胞“變薄”。

4、細(xì)胞與細(xì)胞之間的間隔減小或混在一起，細(xì)胞不再是梭形，而會(huì)成為各種不規(guī)則形狀。

5、如果是貼壁細(xì)胞，會(huì)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的貼壁性減弱，開(kāi)始有細(xì)胞漂浮于培養(yǎng)液中。

6、老化的細(xì)胞，表面分泌物會(huì)增多，細(xì)胞表面的純凈度越來(lái)越低，不再保持透亮。

7、細(xì)胞的增殖速度顯著降低，細(xì)胞活力變?nèi)酢?/span>

8、有些細(xì)胞在正常培養(yǎng)的條件下，也會(huì)開(kāi)始長(zhǎng)角，即發(fā)生了細(xì)胞分化。

9、由于細(xì)胞周期中斷和DNA復(fù)制停止，老化細(xì)胞內(nèi)的DNA含量與正常細(xì)胞類(lèi)似，但細(xì)胞內(nèi)的RNA與蛋白質(zhì)豐度均比正常細(xì)胞要明顯升高。這是由于，

雖然細(xì)胞進(jìn)入老化階段后蛋白質(zhì)的整體合成速率降低，但是蛋白質(zhì)的降解體系受到更加明顯的抑制，導(dǎo)致蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)持續(xù)堆積。

最后，需要強(qiáng)調(diào)的是：由于不同組織來(lái)源的細(xì)胞，其形態(tài)本就各不相同，因此目前還沒(méi)有一個(gè)客觀的、統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)從細(xì)胞形態(tài)判斷并定義老化細(xì)胞。

因此，在細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程中，持續(xù)觀察細(xì)胞，關(guān)注細(xì)胞的變化，是一位細(xì)胞培養(yǎng)員的重要工作內(nèi)容。

 什么是細(xì)胞老化？

1.防止細(xì)胞老化最主要還是要做到勤觀察、勤換液、勤傳代、勤保種，特別是傳代，不能等細(xì)胞太密了之后傳，一般細(xì)胞建議長(zhǎng)到80％~90%融合度傳代最好；

2.換培養(yǎng)液頻率與培養(yǎng)的細(xì)胞種類(lèi)直接相關(guān)，建議新手培養(yǎng)員在培養(yǎng)每一種細(xì)胞時(shí)，多多咨詢(xún)有經(jīng)驗(yàn)的同學(xué)、技術(shù)員等，同時(shí)在實(shí)際操作的過(guò)程中積累經(jīng)驗(yàn)，形成自己的最佳培養(yǎng)體系；

3.選擇可靠且穩(wěn)定的血清和培養(yǎng)基至關(guān)重要：血清和培養(yǎng)基直接為細(xì)胞提供生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)，它們直接關(guān)系到細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況。務(wù)必挑選適宜的血清，否則由于營(yíng)養(yǎng)成分不均衡，可能導(dǎo)致細(xì)胞提前老化。

此外，一個(gè)穩(wěn)定的培養(yǎng)基同樣是培養(yǎng)細(xì)胞的關(guān)鍵因素。

4.在培養(yǎng)大部分貼壁細(xì)胞時(shí)，消化步驟不可避免，但是消化對(duì)細(xì)胞的表面蛋白質(zhì)有一定的破壞作用，因此不能長(zhǎng)時(shí)間進(jìn)行消化并且在選擇消化酶時(shí)也要選擇較為合適的pH和濃度，不然就會(huì)使細(xì)胞老化或者分化；

5.在著手培養(yǎng)細(xì)胞并進(jìn)行傳代的同時(shí)，及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞的凍存工作至關(guān)重要，以確保細(xì)胞種子庫(kù)的持續(xù)存在，這能有效預(yù)防細(xì)胞事故導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室中某一株細(xì)胞絕種。盡管老化細(xì)胞不會(huì)即刻消亡，但它們的基因表達(dá)模式會(huì)經(jīng)歷變化，

可能會(huì)對(duì)生物實(shí)驗(yàn)的結(jié)果產(chǎn)生較大影響。如果發(fā)現(xiàn)正在培養(yǎng)的細(xì)胞老化嚴(yán)重，建議從種子庫(kù)或工作庫(kù)中重新復(fù)蘇細(xì)胞。