SRB 介紹

磺酰羅丹明 B（Sulforhodamine B，SRB）是一種粉紅色的陰離子染料，在細(xì)胞生物學(xué)研究中被廣泛用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的檢測(cè)。SRB 可以與細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)結(jié)合，形成穩(wěn)定的復(fù)合物，其顏色強(qiáng)度與細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)含量成正比。

技術(shù)原理

蛋白質(zhì)結(jié)合：SRB 能夠與細(xì)胞內(nèi)的堿性氨基酸殘基結(jié)合，特別是與精氨酸、賴(lài)氨酸和組氨酸等殘基結(jié)合。這種結(jié)合是相對(duì)穩(wěn)定的，并且在酸性條件下不易解離。

顏色強(qiáng)度與蛋白質(zhì)含量的關(guān)系：SRB 與細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)結(jié)合后，形成的復(fù)合物在特定波長(zhǎng)下具有較高的吸光度。吸光度的大小與細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)含量成正比，因此可以通過(guò)測(cè)量吸光度來(lái)間接反映細(xì)胞的數(shù)量或生物量。

運(yùn)輸和保存方法

冰袋運(yùn)輸。4℃保存，2年有效。

使用方法

1. 取出細(xì)胞，棄去培養(yǎng)液；

2. 小心加入固定液，每孔100 µL，4℃孵育1 h，棄去固定液；

3. 加入清洗液1，每孔100 µL，室溫下靜置30 s，棄去清洗液1，重復(fù)該步驟；

4. 加入染色液，每孔50 µL，室溫下避光孵育15 min，棄去染色液；

5. 加入清洗液2，每孔100 µL，棄去清洗液2（該步驟需快速完成，以免染色漏出胞外），重復(fù)該步驟5-10次，直至把多染料洗盡為止；

6. 加入溶解液，每孔100 µL，室溫下避光孵育5 min；

7. 于515 nm波長(zhǎng)檢測(cè)其吸光值。

相關(guān)問(wèn)題

Q：SRB染色是否會(huì)影響細(xì)胞的活性？

A：SRB染色本身通常不會(huì)對(duì)細(xì)胞的活性產(chǎn)生明顯影響。但是，在固定和染色過(guò)程中，要注意使用適當(dāng)?shù)臈l件，避免對(duì)細(xì)胞造成過(guò)度損傷。

Q：SRB染色與MTT法、CCK-8法等如何選擇？

A：MTS、CCK8及SRB法等都是用來(lái)檢測(cè)細(xì)胞代謝活性的方法，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求和預(yù)算進(jìn)行選擇。

Q：如何處理 SRB 染色后的廢液？

A：SRB 染色后的廢液含有酸性和有毒物質(zhì)，應(yīng)按照實(shí)驗(yàn)室的規(guī)定進(jìn)行妥善處理。一般來(lái)說(shuō)，可以將廢液收集在特定的容器中，經(jīng)過(guò)中和和處理后再排放。

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