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【飛諾美色譜】山楂卷中展青霉素的分析方法

來源:艾杰爾飛諾美   2024年11月26日 10:34  

 

 

本實(shí)驗(yàn)根據(jù)GB 5009.185-2016建立了山楂卷中展青霉素的前處理方法,采用Cleanert® PAX結(jié)合高效液相色譜的檢測(cè)方法,對(duì)山楂卷中的展青霉素進(jìn)行了測(cè)定。樣品經(jīng)提取和酶解處理后,用Cleanert® PAX進(jìn)行凈化,Venusil HLP C18(5 µm,4.6 × 250 mm)色譜柱進(jìn)行檢測(cè),外標(biāo)法定量。


結(jié)果表明,當(dāng)展青霉素加標(biāo)量為0.1 mg/kg時(shí),回收率為105.6%,能夠滿足檢測(cè)要求。

 

實(shí)驗(yàn)

部分

儀器、試劑與材料

 

主要儀器設(shè)備/耗材


·高效液相色譜儀

試劑材料

·甲醇、乙腈、乙酸乙酯均為色譜純;乙酸、乙酸銨為分析純

·5 mmol/L乙酸銨溶液:稱取0.38 g乙酸銨,加水溶解并定容至1000 mL

·乙酸溶液:取10 mL乙酸,加入250 mL水中,混勻

·展青霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液:乙腈溶解

·果膠酶:10000 U/g

·Cleanert® PAX,500 mg/6 mL(P/N:AX5006)

實(shí) 驗(yàn)

部分

樣品處理

 

樣品提取

稱取1 g已均質(zhì)好的山楂卷樣品,加入10 mL水和

75 µL 果膠酶,渦旋混勻1 min,室溫避光放置過夜后,加入10 mL乙酸乙酯,渦旋混合2 min,6000 r/min離心5 min,取上層乙酸乙酯層至100 mL雞心瓶中。剩余水相再加入10 mL乙酸乙酯提取一次,合并兩次乙酸乙酯提取液,在40℃旋蒸至干,以5 mL乙酸溶液溶解殘留物,超聲1 min,待凈化。

 

樣品凈化

將Cleanert PAX小柱依次用6 mL甲醇,6 mL水

活化平衡,將待凈化液全部轉(zhuǎn)移至小柱上,棄去流出液,再用6 mL乙酸銨溶液,6 mL水淋洗小柱,棄去流出液并抽干小柱15 min。加入8 mL甲醇洗脫,收集流出液置于40℃氮吹至剩余200 ~ 300 µL,用5%乙腈水溶液定容至1 mL,渦旋30 s溶解殘留物,過0.22 µm尼龍針式過濾器過濾,待檢測(cè)。

 

實(shí)驗(yàn)條件 (色譜條件)

色譜柱:

Venusil HLP C18,5 µm,4.6 × 250 mm;

柱溫:40℃;

流速:1.2 mL/min;

進(jìn)樣量:100 µL;

波長(zhǎng):276 nm

 

 

實(shí)驗(yàn)

部分

結(jié)果與討論

 

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

由表2可知,采用Cleanert PAX結(jié)合高效液相色譜的方法檢測(cè)山楂卷中展青霉素,加標(biāo)回收率為105.6%,能夠滿足檢測(cè)要求。由圖1 ~ 圖3可知,用Venusil HLP C18檢測(cè)山楂卷的加標(biāo)樣品,分離效果良好。



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實(shí)驗(yàn)討論

本實(shí)驗(yàn)參照國(guó)標(biāo)方法用PAX 150 mg/6 mL做山楂制品中的展青霉素,經(jīng)標(biāo)樣過柱發(fā)現(xiàn)此規(guī)格的小柱使用國(guó)標(biāo)方法,僅能吸附50%的目標(biāo)物,故加大小柱規(guī)格至500 mg/6 mL,回收率能夠滿足檢測(cè)要求。

 

本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜檢測(cè),由于山楂制品的雜質(zhì)較多,普通的C18色譜柱對(duì)雜質(zhì)和目標(biāo)物的分離并不理想,后改用極性嵌合的HLP C18色譜柱,發(fā)現(xiàn)分離度有很大改善,目標(biāo)物能和雜質(zhì)分離。國(guó)標(biāo)方法中建議山楂制品的檢測(cè)儀器為L(zhǎng)C-MS/MS,所以本報(bào)告中的檢測(cè)方法僅供參考。

結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)建立了山楂卷中展青霉素的前處理方法,用Cleanert® PAX結(jié)合高效液相色譜對(duì)加標(biāo)量為0.1 mg/kg的樣品進(jìn)行了測(cè)定,加標(biāo)回收率為105.6%,RSD小于10%,可以滿足檢測(cè)要求,且凈化效果良好,方法穩(wěn)定。說明Cleanert® PAX可以用于山楂卷中展青霉素的檢測(cè)。

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