摘要：本文介紹了分別使用 Agilent 6470 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng) (LC-MS/MS) 和 1200 LC-DAD檢測(cè)蠔油和豆瓣醬中 7 種對(duì)羥基苯甲酸酯的分析方法，采用兩種檢測(cè)器可滿足不同檢測(cè)限和定量限的要求。色譜柱使用 Agilent Poroshell 120 EC-C18，實(shí)現(xiàn)了 7 種對(duì)羥基苯甲酸酯的良好分離，前處理使用 Agilent Bond Elut QuEChERS 分散 SPE 試劑盒對(duì)蠔油和豆瓣醬基質(zhì)進(jìn)行凈化，過(guò)程簡(jiǎn)便、快速。分別采用 LC-MS/MS 和 LC-DAD 進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，方法檢測(cè)限分別為 5 μg/kg 和 0.5 mg/kg，定量限分別為 10 μg/kg 和 1 mg/kg。在相應(yīng)的濃度范圍內(nèi)各分析物的線性相關(guān)系數(shù)均大于 0.99。在蠔油和豆瓣醬中相應(yīng)加標(biāo)濃度下，7 種對(duì)羥基苯甲酸酯的平均加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為 70.1%–105.8% 和1.5%–14.7%，準(zhǔn)確度和精密度良好，可用于豆瓣醬和蠔油等調(diào)味品中對(duì)羥基苯甲酸酯類的分析檢測(cè)。

前言對(duì)羥基苯甲酸酯類化合物是具有防腐作用的添加劑，可有效防止霉菌、酵母菌和細(xì)菌的生長(zhǎng)。由于不同的酯抑制細(xì)菌的能力有所不同，因此在烘焙食品、調(diào)味品、果汁和果凍等食品中常用由不同酯類組成的復(fù)配型防腐劑。在我國(guó)，GB 2760-2014[1] 規(guī)定，對(duì)羥基苯甲酸酯類及其鈉鹽在調(diào)味品（如醬油、醋、蠔油等）中的最大使用量為 0.25 g/kg（以對(duì)羥基苯甲酸計(jì)），而有些國(guó)家/地區(qū)（如馬來(lái)西亞）則禁止使用，因此針對(duì)不同國(guó)家/地區(qū)的規(guī)定有必要建立滿足不同檢測(cè)限要求的分析方法。關(guān)于食品中對(duì)羥基苯甲酸酯類化合物的檢測(cè)，GB/T 5009.31-2016[2]規(guī)定使用配備 FID 的氣相色譜系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)。該方法需要首先將樣品中的對(duì)羥基苯甲酸酯用鹽酸酸化；并用乙mi多次重復(fù)提取，用飽和氯化鈉溶液和碳酸氫鈉溶液多次洗滌；濃縮近干后，用乙醇復(fù)溶；然后進(jìn)樣分析。樣品前處理過(guò)程復(fù)雜、耗時(shí)，且溶劑消耗量大。SN/T 4047-2014[3] 規(guī)定的樣品前處理方法則是：用乙腈多次提取，氮吹后用 35% 甲醇水定容；然后經(jīng) LC-C18 固相萃取柱凈化，再次氮吹后用甲醇定容。該方法氮吹步驟多，同樣存在耗時(shí)較長(zhǎng)的弊端。 

本應(yīng)用選擇 7 種對(duì)羥基苯甲酸酯類防腐劑（結(jié)構(gòu)和 LogP 值見(jiàn)圖 1）作為目標(biāo)化合物，以兩種比較復(fù)雜的典型調(diào)味品（即蠔油和豆瓣醬）為研究基質(zhì)，使用 Agilent Bond Elut QuEChERS 分散SPE 進(jìn)行凈化，并分別采用高靈敏度 Agilent 6470 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng) (LC/MS/MS) 和 1200 LC-DAD 進(jìn)行檢測(cè)，該方法樣品前處理過(guò)程簡(jiǎn)單、快速和高效，可適用不同的檢測(cè)需求。

實(shí)驗(yàn)部分試劑和樣品實(shí)驗(yàn)用乙腈、甲醇均為色譜純，購(gòu)于北京迪馬科技有限公司；實(shí)驗(yàn)用水為娃哈哈純凈水。7 種對(duì)羥基苯甲酸酯標(biāo)準(zhǔn)品 (BePure) 購(gòu)于曼哈格公司，濃度均為1000 µg/mL 且以甲醇為溶劑。蠔油 和豆瓣醬樣品為市售產(chǎn)品。標(biāo)準(zhǔn)品制備分別取適量對(duì)羥基苯甲酸酯標(biāo)準(zhǔn)品，用乙腈配制成濃度為100 μg/mL 的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，逐級(jí)稀釋后備用。校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制：準(zhǔn)確移取適量的上述標(biāo)準(zhǔn)工作液，用乙腈稀釋，分別得到濃度為 1、5、10、50、 100、200 和 500 ng/mL的校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)工作液和濃度為 0.2、0.5、1、2、5、10、50 和100 μg/mL 的校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)工作液，分別進(jìn) LC-MS/MS 和 LC-DAD 檢測(cè)。臨用現(xiàn)配。

樣品前處理稱取 5 g（精確至 0.01 g）樣品于 50 mL 聚丙烯離心管中，加入陶瓷均質(zhì)子；然后加入 5 mL 水和 10 mL 乙腈，渦旋振蕩 5 min；加入 Bond Elut QuEChERS EN 萃取試劑盒（部件號(hào) 5982-5650），渦旋振蕩 2 min，再以 8000 r/min 離心 5 min；取 6 mL 上清液，加入 Bond Elut QuEChERS 分散 SPE 試劑盒（部件號(hào)5982-5158）中，渦旋振蕩 2 min，再以 8000 r/min 離心 5 min；過(guò) 0.2 μm 尼龍微孔濾膜，待測(cè)。

MS 條件儀器配置： Agilent 6470 三重四極桿質(zhì)譜儀（部件號(hào) G6470B）離子源模式： ESI (-)干燥氣溫度： 250 °C干燥氣流速： 7 L/min鞘氣溫度： 350 °C鞘氣流速： 12 L/min霧化器壓力： 40 psi毛細(xì)管電壓： 3000 V（負(fù)）掃描模式 ： MRM（具體參數(shù)見(jiàn)下表 1）

結(jié)論本應(yīng)用使用 Poroshell 120 EC-C18 色譜柱實(shí)現(xiàn)了 7 種對(duì)羥基苯甲酸酯的分離，并分別采用 Agilent 6470 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng) (LC-MS/MS) 和 LC-DAD 進(jìn)行檢測(cè)，建立了可適用于不同檢測(cè)限和定量限要求的方法。使用 Agilent Bond Elut QuEChERS 分散SPE 試劑盒對(duì)蠔油和豆瓣醬基質(zhì)實(shí)現(xiàn)了高效的凈化，比現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)方法中的樣品前處理過(guò)程更加簡(jiǎn)便、快速。使用 LC-MS/MS 進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，在 1–500 ng/mL 的濃度范圍內(nèi)各目標(biāo)分析物的相關(guān)系數(shù)均大于 0.99；方法檢測(cè)限為 5 μg/kg，定量限為 10 μg/kg，在蠔油和豆瓣醬中加標(biāo)濃度為 10–50 μg/kg 時(shí)，7 種對(duì)羥基苯甲酸酯的平均加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為 70.1%–105.8% 和1.5%–14.7%，表現(xiàn)出良好的準(zhǔn)確度和精密度。使用 LC-DAD 檢測(cè)時(shí)，在 0.2–100 μg/mL 的濃度范圍內(nèi)各目標(biāo)分析物的相關(guān)系數(shù)均大于 0.99；方法檢測(cè)限為 0.5 mg/kg，定量限為 1 mg/kg，在蠔油和豆瓣醬中加標(biāo)濃度為 1–10 mg/kg 時(shí)，7 種對(duì)羥基苯甲酸酯的平均加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為 74.7%–100.6% 和1.0%–3.9%，同樣表現(xiàn)出良好的準(zhǔn)確度和精密度。兩種檢測(cè)方法均適用于調(diào)味品蠔油和豆瓣醬中對(duì)羥基苯甲酸酯的定量分析。