對(duì)于液相色譜工作者來(lái)說(shuō)，想要保證液相色譜實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行，除了確保手上有一支合適的色譜柱之外，選擇和配置好實(shí)驗(yàn)流動(dòng)相也是成敗的關(guān)鍵因素。通常，用于反相 LC 的流動(dòng)相可以是純?nèi)軇?、混合溶劑或含有緩沖液和添加劑的溶劑。而實(shí)際的流動(dòng)相配置中有數(shù)百種溶劑可供選擇，因此配置出符合需求的流動(dòng)相變得具有挑戰(zhàn)性。本期，我們將從流動(dòng)相的溶劑特性、緩沖液和添加劑選擇以及色譜技術(shù)對(duì)流動(dòng)相的需求趨勢(shì)展開介紹。

流動(dòng)相溶劑特性

流動(dòng)相的一些特性可以幫助我們?yōu)榉聪喾治鲞x擇正確的流動(dòng)相組成。這些特性包括：

• 溶劑純度——在 LC 中選擇作為流動(dòng)相的溶劑應(yīng)為 色譜純度或質(zhì)譜級(jí)純度，應(yīng)進(jìn)行過濾和超聲處理，以確保 UV 光譜中的吸光度最小且不含氣泡。

• 溶劑粘度——反相流動(dòng)相應(yīng)為最佳粘度，以幫助確保通過HPLC 柱固定相的最佳線速度，從而提供更窄和更尖銳的峰，因而提高分析的整體靈敏度。

• 折光率——這是使用示差折光檢測(cè)器時(shí)的一個(gè)關(guān)鍵考慮因素。理想情況下，當(dāng)使用示差檢測(cè)器時(shí)，流動(dòng)相和樣品溶劑應(yīng)具有相似的折射率以避免出現(xiàn)負(fù)峰，換句話說(shuō)，樣品應(yīng)在流動(dòng)相中制備。

• 溶劑沸點(diǎn)——最好選擇沸點(diǎn)低的溶劑以提高回收率，特別是在LC-MS 中，揮發(fā)性更強(qiáng)的溶劑將改善離子化，從而提高M(jìn)S 靈敏度。

• 無(wú)腐蝕性——流動(dòng)相溶劑不得腐蝕流路中的 HPLC 管、泵閥、密封件和其他部件。

• 溶劑毒性——確保溶劑無(wú)毒并且應(yīng)使用穩(wěn)定狀態(tài)下的溶劑。

• 溶劑混溶性——選擇與樣品混溶的溶劑。分析物也必須可溶。否則，在色譜柱入口篩板處將產(chǎn)生樣品沉淀，從而引發(fā)高背壓、基線問題、導(dǎo)致分析物峰靈敏度較低以及色譜圖中峰面積和峰形問題。

• 流動(dòng)相透光度——選擇一種在檢測(cè)波長(zhǎng)下可以透射的流動(dòng)相。

• 洗脫強(qiáng)度——這是溶劑從固定相中洗脫目標(biāo)分析物的能力。洗脫強(qiáng)度越高，溶劑越有效，選擇性越好。流動(dòng)相溶劑應(yīng)具有最佳和足夠的洗脫強(qiáng)度，以實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)分析物的選擇性。

考慮到這些特性，大多數(shù)色譜工作者的流動(dòng)相溶劑是乙腈，因?yàn)樗哂凶罴颜扯?、良好?UV 吸光度和足夠的洗脫強(qiáng)度。

其他常見的溶劑包括甲醇，甲醇的粘度比乙腈高（特別是與水混合時(shí)），還有四氫呋喃，它具有高洗脫強(qiáng)度，但因?yàn)槎拘愿髲亩嬖诎踩珕栴}。甲基叔丁基醚可作為四氫呋喃的替代品。

選擇流動(dòng)相緩沖液和添加劑

除了選擇流動(dòng)相溶劑外，還需要選擇合適的緩沖液和/或其他添加劑。緩沖液用于控制流動(dòng)相的 pH 值。酸性添加劑（pH 為 2 至 4）用于大多數(shù)制藥應(yīng)用，而堿性流動(dòng)相（pH 大于 8）用于為堿性分析物實(shí)現(xiàn)更高的保留和改善的峰形。

簡(jiǎn)化的流動(dòng)相，實(shí)驗(yàn)最佳的選擇

為反相 LC 選擇更簡(jiǎn)單的流動(dòng)相已成為常態(tài)。這背后的實(shí)用性顯而易見，隨著色譜柱固定相和色譜柱制造技術(shù)的進(jìn)步以及高靈敏度、高分辨率儀器的可及性，減少了對(duì)緩沖液和其他添加劑的需求，而這些需求在以前是得到良好色譜所必需的條件。

例如，傳統(tǒng)上將乙腈與 95% 的水混合以通過確保兩種流動(dòng)相在粘度和表面張力方面相似度來(lái)提高混合效率。然而，隨著泵的改進(jìn)和在線混合器的引入，這種需求變得不再必要。

除此之外，隨著使用具有線性梯度分布的更簡(jiǎn)單的溶劑，方法變得更加穩(wěn)健，并且隨著高分辨率質(zhì)譜技術(shù)的快速發(fā)展，進(jìn)一步減少了 LC 方法中對(duì)復(fù)雜流動(dòng)相的需求。