液相色譜柱壽命有限，即使在做到良好的清洗和儲(chǔ)存之后也難逃到達(dá)壽命終點(diǎn)的事實(shí)。但是，我們還是可以采取一些措施來最大限度地延長使用液相色譜柱的壽命。

我們所有的液相色譜柱出庫時(shí)都儲(chǔ)存于特定的出廠溶劑中。對(duì)于反相色譜柱，該溶劑通常由有機(jī)物（乙腈或甲醇）和水組成。在安裝之前，需要先用流動(dòng)相對(duì)色譜柱進(jìn)行沖洗，然后進(jìn)行安裝，最后再用流動(dòng)相調(diào)節(jié)色譜柱之后再進(jìn)行相關(guān)分析。

對(duì)于在反相和正相條件下都可以使用的色譜柱，需要特別關(guān)注出廠溶劑并確認(rèn)流動(dòng)相與出廠溶劑混溶/兼容。如果不兼容，則需要進(jìn)行溶劑切換。

準(zhǔn)備使用色譜柱時(shí)，可以通過安裝在線過濾器、捕集柱和保護(hù)柱來幫助保持其完整性。這些有助于防止污染物損壞我們要使用的 HPLC 分析柱。但是，當(dāng)污染確實(shí)發(fā)生時(shí)，還是可以采取一些方法進(jìn)行應(yīng)對(duì)。

清洗液相色譜柱

色譜柱在使用之后，存放之前，建議對(duì)其進(jìn)行一定的清洗。清洗程序通常包括使用相似色譜柱上最后一次使用的溶劑組成（等度/梯度）對(duì)其清洗，其中需要用超純水代替緩沖液，以確保從色譜柱中去除緩沖液成分。還可以適當(dāng)增加清洗液中的有機(jī)物百分比，以進(jìn)一步去除任何疏水性雜質(zhì)。

反沖液相色譜柱

如果發(fā)現(xiàn)峰形變差并且伴隨背壓增加，建議對(duì)色譜柱進(jìn)行反向沖洗。在反向沖洗之前，重要的是要確保流動(dòng)相或柱內(nèi)溶劑與清洗溶劑混溶，并且流速不超過色譜柱推薦流速的一半。有關(guān)詳細(xì)步驟，請(qǐng)按照色譜柱保養(yǎng)指南中提到的說明進(jìn)行操作。一般可以使用以下公式確定色譜柱清洗液體積：V = pr2L, 其中 V 是以 mL 為單位的色譜柱體積，r 是以 cm 為單位的色譜柱半徑，L 是以 cm 為單位的色譜柱長度。

在使用完成后正確清洗反相 HPLC 色譜柱時(shí)，首先將流動(dòng)相更換為 95% 超純水和 5% 乙腈，然后以大約 10 倍的柱體積和推薦流速的一半速度對(duì)色譜柱進(jìn)行沖洗以清除任何留在 色譜柱中的緩沖液。然后還可以根據(jù)需要逐步改變清洗液的配比，將有機(jī)物含量增加到約 95% 乙腈和 5% 水。

反沖過后，在使用前需要將色譜柱正向連接并且用流動(dòng)相調(diào)節(jié)色譜柱。

請(qǐng)注意！

在反向沖洗色譜柱時(shí)，請(qǐng)斷開色譜柱與檢測器的連接。了解如何使用這些技巧正確地反向沖洗色譜柱。

液相色譜柱的保存

色譜柱使用后的正確存放也很重要，尤其是當(dāng)要存放很長時(shí)間的時(shí)候。當(dāng)色譜柱中仍含有一些緩沖液或離子對(duì)試劑時(shí)，請(qǐng)務(wù)必不要將其存放起來。需用不含緩沖液的流動(dòng)相以五倍柱體積的量來沖洗色譜柱。對(duì)于具有離子對(duì)試劑的色譜柱，需要延長清洗時(shí)間以將它們從色譜柱中去除。清洗后，將反相色譜柱保存在乙腈/水 (65:35 v/v) 中，甲醇可以代替乙腈，正相色譜柱保存在 100% 正己烷或 IPA 中，離子交換柱保存在 100% 甲醇中，HILIC 色譜柱保存在乙腈/水 (80:20 v/v) 溶液中。