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超高通量生物透射電鏡的樣品制備與操作要求非常嚴(yán)格，以下是詳細(xì)的步驟和注意事項(xiàng)：
一、樣品制備
取材
新鮮取材是關(guān)鍵，組織或細(xì)胞必須保持新鮮，避免固定前的任何結(jié)構(gòu)變化。
取材體積要小，一般控制在1~2mm³，以確保固定液能夠充分滲透。
取材位置要準(zhǔn)確，直接針對(duì)需要觀察的目的部位，避免不必要的損傷。
操作過程中要保持低溫，所有物品都要預(yù)冷，以防止樣品結(jié)構(gòu)變化。
固定
固定是為了保護(hù)樣品結(jié)構(gòu)，使其在后續(xù)操作中不受破壞。固定液由固定劑和緩沖液組成，緩沖液模仿細(xì)胞外液成分，維持穩(wěn)定的pH值和滲透壓。
新鮮取材后立即投入4℃預(yù)冷的固定液中，然后放入4℃冰箱固定保存。
對(duì)于無法下沉的樣品，可以通過抽真空使其沉下去。
脫水
脫水是為了讓包埋劑能夠滲入組織內(nèi)部。常用的脫水劑有酒精、丙酮等。
脫水時(shí)間不宜過長(zhǎng)，常用逐級(jí)梯度脫水，如依次浸泡酒精濃度為30%、50%、70%、80%、90%、100%的溶液，一般浸泡時(shí)間為10~20分鐘，最后可以用100%丙酮浸泡。
包埋
包埋包括滲透、包埋和聚合三個(gè)步驟。
配制包埋劑時(shí)，軟硬度要易于調(diào)節(jié)，易于滲透。
包埋時(shí)要防止產(chǎn)生氣泡，聚合時(shí)的溫度要盡可能低。
切片
將經(jīng)過滲透處理的樣品包埋起來后，進(jìn)行切片處理，獲得70~90nm的切片。
染色
切片經(jīng)檸檬酸鉛溶液和醋酸雙氧鈾50%乙醇飽和溶液各染色5~10分鐘，晾干后即可在透射電鏡中觀察。
二、操作要求
操作環(huán)境
透射電子顯微鏡需要在高真空環(huán)境下工作，因此樣品必須保持干燥和清潔。
操作室內(nèi)應(yīng)保持恒定的溫度和濕度，以防止樣品在觀察過程中發(fā)生變化。
操作技能
操作人員需要具備專業(yè)的知識(shí)和技能，熟悉透射電子顯微鏡的工作原理和操作流程。
在進(jìn)行樣品觀察和拍攝時(shí)，需要掌握合適的放大倍數(shù)、焦距和曝光時(shí)間等參數(shù)。
安全防護(hù)
透射電子顯微鏡操作過程中需要接觸高電壓和高真空環(huán)境，因此必須采取嚴(yán)格的安全防護(hù)措施。
操作人員需要穿戴合適的防護(hù)服和手套，避免直接接觸高壓部件和真空系統(tǒng)。
維護(hù)與保養(yǎng)
定期對(duì)透射電子顯微鏡進(jìn)行維護(hù)和保養(yǎng)，包括清潔鏡頭、檢查真空系統(tǒng)、調(diào)整電子束等。
保持設(shè)備的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。
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