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陽(yáng)離子交換柱的使用方法
注意
Chrompack IonoSpher C 色譜柱填充的是改性硅膠材料。向柱內(nèi)導(dǎo)入堿性溶劑（pH>6.5）或酸性溶劑（pH<2.5）會(huì)溶解硅膠材料導(dǎo)致柱子損壞。
1. 簡(jiǎn)介
Chrompack IonoSpher C 柱填充硅膠基質(zhì)的強(qiáng)陽(yáng)離子交換材料，含有磺酸鹽功能團(tuán)。特別設(shè)計(jì)用于使用常規(guī)HPLC分析有機(jī)和無(wú)機(jī)陽(yáng)離子。
2. 色譜柱老化
在開(kāi)始分析工作以前，柱子必須經(jīng)過(guò)正確的老化。一個(gè)沒(méi)有正確老化的柱子可能會(huì)帶來(lái)問(wèn)題，諸如很差的柱效或者分離情況發(fā)生變化等等。
要老化這類柱子，首先要使用甲醇淋洗，然后使用去離子水。再用你選用的洗脫液進(jìn)行平衡。
在發(fā)貨以前，每根柱子都已經(jīng)測(cè)試過(guò)并進(jìn)行了老化。因此沒(méi)有必要在*次使用時(shí)用水沖洗）。
3. 洗脫液
推薦在這類柱上使用的洗脫液是要求低電導(dǎo)的緩沖液，例如檸檬酸或酒石酸緩沖液（或其混合溶液），pH范圍從2.5到6.5，其中有乙二胺作為洗脫陽(yáng)離子。
不能使用水楊酸緩沖液，因?yàn)樗畻钏岱纸猱a(chǎn)物會(huì)改變固定相的性質(zhì)。
洗脫液在使用以前要脫氣，并用0.5微米濾膜過(guò)濾，防止發(fā)生檢測(cè)和泵送問(wèn)題。
一定要在開(kāi)始使用系統(tǒng)以前檢查有否微生物生長(zhǎng)，否則你的柱子會(huì)堵塞，柱壓會(huì)升高到無(wú)法接受的水平。
Chrompack IonoSpher C 色譜柱填充的是改性硅膠材料。向柱內(nèi)導(dǎo)入堿性溶劑（pH>6.5）或酸性溶劑（pH<2.5）會(huì)溶解硅膠材料導(dǎo)致柱子損壞。
1. 簡(jiǎn)介
Chrompack IonoSpher C 柱填充硅膠基質(zhì)的強(qiáng)陽(yáng)離子交換材料，含有磺酸鹽功能團(tuán)。特別設(shè)計(jì)用于使用常規(guī)HPLC分析有機(jī)和無(wú)機(jī)陽(yáng)離子。
2. 色譜柱老化
在開(kāi)始分析工作以前，柱子必須經(jīng)過(guò)正確的老化。一個(gè)沒(méi)有正確老化的柱子可能會(huì)帶來(lái)問(wèn)題，諸如很差的柱效或者分離情況發(fā)生變化等等。
要老化這類柱子，首先要使用甲醇淋洗，然后使用去離子水。再用你選用的洗脫液進(jìn)行平衡。
在發(fā)貨以前，每根柱子都已經(jīng)測(cè)試過(guò)并進(jìn)行了老化。因此沒(méi)有必要在*次使用時(shí)用水沖洗）。
3. 洗脫液
推薦在這類柱上使用的洗脫液是要求低電導(dǎo)的緩沖液，例如檸檬酸或酒石酸緩沖液（或其混合溶液），pH范圍從2.5到6.5，其中有乙二胺作為洗脫陽(yáng)離子。
不能使用水楊酸緩沖液，因?yàn)樗畻钏岱纸猱a(chǎn)物會(huì)改變固定相的性質(zhì)。
洗脫液在使用以前要脫氣，并用0.5微米濾膜過(guò)濾，防止發(fā)生檢測(cè)和泵送問(wèn)題。
一定要在開(kāi)始使用系統(tǒng)以前檢查有否微生物生長(zhǎng)，否則你的柱子會(huì)堵塞，柱壓會(huì)升高到無(wú)法接受的水平。
4. 流量和壓力
| 柱內(nèi)徑（毫米） | 流速（ml/min）* | 流速（ml/min）zui高 |
| 2.0 | 0.2 | 1.0 |
| 3.0 | 0.4 | 2.0 |
| 4.6 | 1.0 | 4.0 |
| 10.0 | 4.7 | 18.0 |
注意：zui高壓力：不銹鋼柱：4500psi;玻璃柱：3000psi
增加流速或者降低流速要采取小的間隔變化以防止填充床的擾動(dòng)。
如果你想更換柱子，要降低流量至0，等待洗脫液*流出柱子為止（2分鐘）。
拆除柱子而沒(méi)有等待壓力的降低會(huì)損壞柱子。
高柱壓的產(chǎn)生一般是由于不正確地使用柱子的結(jié)果。
使用保護(hù)柱（見(jiàn)第6節(jié)）會(huì)防止污染物沉積在分析柱上。
5. 樣品處理
保持柱子長(zhǎng)壽的關(guān)鍵是進(jìn)樣前適當(dāng)?shù)牡臉悠诽幚?。你必須防止將疏水?/span>/與流動(dòng)相極性差別很大的化合物泵入色譜柱，不管是來(lái)自流動(dòng)相還是樣品。特別地，要禁止導(dǎo)入顆粒雜質(zhì)。這些zui終都會(huì)造成操作壓力的增高而且非常困難或者不可能去除。
6. 保護(hù)柱
一定要使用保護(hù)柱，因?yàn)闃悠泛拖疵撘何廴究赡軙?huì)造成柱壓力的增高而且影響選擇性。對(duì)于ChromSep 柱我們建議使用ChromSep Cation 交換保護(hù)柱。當(dāng)柱壓增高的或者觀察到柱效降低的時(shí)候就需要更換保護(hù)柱了。對(duì)于常用不銹鋼柱，我們建議使用Chromguard Cation exchange High Efficiency（）柱（10X3.0mm）或High Capacity（高容量）柱（50X3.0mm）。
7. 進(jìn)樣量和濃度
| 柱尺寸（長(zhǎng)度*內(nèi)徑） | zui大樣品體積 |
| 250×2.0mm | ±10μl |
| 200×3.0mm | ±15μl |
| 250×4.6mm | ±50μl |
| 250×10.0mm | ±250μl |
當(dāng)樣品的洗提強(qiáng)度比洗脫液低（在柱樣品預(yù)濃縮）的時(shí)候，更高的樣品量也可以注射。
8. 溫度
Chrompack IonoSpher C 柱可以在室溫環(huán)境使用。為了提高柱子的穩(wěn)定性，建議不要在40°C以上使用。
Chrompack IonoSpher C 柱可以在室溫環(huán)境使用。為了提高柱子的穩(wěn)定性，建議不要在40°C以上使用。
9. 貯存
在貯存柱子以前，建議先用去離子水，然后用甲醇沖洗。一定不要在柱子內(nèi)充滿緩沖液或者其他含鹽類的洗脫液的情況下貯存色譜柱。
在貯存柱子以前，建議先用去離子水，然后用甲醇沖洗。一定不要在柱子內(nèi)充滿緩沖液或者其他含鹽類的洗脫液的情況下貯存色譜柱。
10. 檢測(cè)靈敏度
對(duì)于陽(yáng)離子的檢測(cè)，建議進(jìn)行電導(dǎo)率的測(cè)定,使用前面提到的低電導(dǎo)洗脫液。
對(duì)于陽(yáng)離子的檢測(cè)，建議進(jìn)行電導(dǎo)率的測(cè)定,使用前面提到的低電導(dǎo)洗脫液。
11.柱效損失的可能原因
1）額外的峰展寬。要保證管路的長(zhǎng)度和內(nèi)徑都保持zui小。
2）洗脫的平衡時(shí)間不夠。
3）不正確的洗脫液pH或洗脫液的離子強(qiáng)度。
4）洗脫液中存在不正確的陰離子。制備新鮮的洗脫液。
5）固定相污染。
a.高柱壓伴隨分辨率降低。
1] 顆粒物積聚在燒結(jié)物或者填充物床上。
（a）樣品來(lái)源---過(guò)濾或離心
（b）洗脫液來(lái)源---過(guò)濾洗脫液，封閉洗脫液容器。
（c）系統(tǒng)來(lái)源---沖洗整個(gè)系統(tǒng)管路和泵;安裝在線系統(tǒng)過(guò)濾器。
2] 蛋白質(zhì)類物質(zhì)的積聚
（a）微生物在樣品中生長(zhǎng)。
（b）微生物在洗脫液中生長(zhǎng)。
b. 正常柱壓伴隨柱效降低
1] 有機(jī)污染
（a）樣品中有脂肪，油脂，脂質(zhì)。固定相的表面被覆蓋。
（b）從樣品中帶來(lái)的不確切的有機(jī)物或未正確制備的洗脫液。
（c）在洗脫液制備完成以后帶入洗脫液中的非特定有機(jī)物，例如在運(yùn)輸時(shí)從大氣中帶來(lái)。
1）額外的峰展寬。要保證管路的長(zhǎng)度和內(nèi)徑都保持zui小。
2）洗脫的平衡時(shí)間不夠。
3）不正確的洗脫液pH或洗脫液的離子強(qiáng)度。
4）洗脫液中存在不正確的陰離子。制備新鮮的洗脫液。
5）固定相污染。
a.高柱壓伴隨分辨率降低。
1] 顆粒物積聚在燒結(jié)物或者填充物床上。
（a）樣品來(lái)源---過(guò)濾或離心
（b）洗脫液來(lái)源---過(guò)濾洗脫液，封閉洗脫液容器。
（c）系統(tǒng)來(lái)源---沖洗整個(gè)系統(tǒng)管路和泵;安裝在線系統(tǒng)過(guò)濾器。
2] 蛋白質(zhì)類物質(zhì)的積聚
（a）微生物在樣品中生長(zhǎng)。
（b）微生物在洗脫液中生長(zhǎng)。
b. 正常柱壓伴隨柱效降低
1] 有機(jī)污染
（a）樣品中有脂肪，油脂，脂質(zhì)。固定相的表面被覆蓋。
（b）從樣品中帶來(lái)的不確切的有機(jī)物或未正確制備的洗脫液。
（c）在洗脫液制備完成以后帶入洗脫液中的非特定有機(jī)物，例如在運(yùn)輸時(shí)從大氣中帶來(lái)。
12. 對(duì)于糾正污染問(wèn)題的可能有效的操作
1）準(zhǔn)備新鮮的洗脫液
在很多情況下，柱效的喪失可以歸結(jié)為洗脫液的污染。所以，要在使用柱子以前準(zhǔn)備新鮮的洗脫液，沖洗所有液體管路。洗脫液應(yīng)當(dāng)用0.2到0.4微米的濾膜過(guò)濾，在使用以前要脫氣。
2）色譜柱再生
要進(jìn)行色譜柱的再生工作
a. 首先倒轉(zhuǎn)色譜柱
b. 以0.4ml/min的流速用1M NH4NO3洗脫30ml。
c. 以0.4ml/min的流速用40：60 （v：v）的甲醇/水洗脫30ml。
d. 以0.4ml/min的流速用異丙醇洗脫30ml。
e. 以0.4ml/min的流速用水洗脫30ml。
f. 以0.4ml/min的流速用洗脫液洗脫30ml。
g. 將柱子轉(zhuǎn)回正常方向。
用洗脫液平衡。
上海迪發(fā)儀器儀表有限公司為瑞士Hamilton華東區(qū)授權(quán)代理商，為您提供*的離子交換柱選型指南，更多詳情請(qǐng)?jiān)L問(wèn)：www.difa17.com，：，技術(shù)：，：difabio
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