小 M, 小 M, 我導(dǎo)兒開始安排測(cè) IC50 了，雖然查文獻(xiàn)經(jīng)常遇到……但還是暈，概念分不清？不懂如何測(cè)？有啥區(qū)別？確實(shí)！大家常在文獻(xiàn)中看到 IC50、EC50、ED50 等數(shù)值的測(cè)定，實(shí)驗(yàn)不迷茫~我們先從大家最熟悉的 IC50 值開始。

IC50 (Half maximal inhibitory concentration) 又叫半數(shù)抑制濃度，So，單位是濃度單位，比如 nM、µM 等等。

我們常在文獻(xiàn)中看到 IC50、EC50、ED50 等等數(shù)值的測(cè)定，這些指標(biāo)被廣泛應(yīng)用于藥物開發(fā)、毒理學(xué)、基礎(chǔ)研究等領(lǐng)域，為理解藥物效應(yīng)和優(yōu)化治療策略提供了有力支持。

(2) IC50 值測(cè)定：對(duì)初篩所得 33 個(gè)分子化合物復(fù)篩 ，將其按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)加入激酶反應(yīng)體系中，進(jìn)行 IC50 值測(cè)定。

(3) 發(fā)光測(cè)定：通過(guò)發(fā)光測(cè)定監(jiān)測(cè) CaMKII-δ 磷酸轉(zhuǎn)移酶活性（注意：如果激酶反應(yīng)不是在室溫下進(jìn)行，在加入 ADP-Glo™ 試劑之前，將板平衡至室溫）。

(4) 記錄發(fā)光：使用微孔板讀數(shù)儀記錄讀數(shù)。

(5) 數(shù)據(jù)分析：數(shù)據(jù)以平均值 ±SEM 表示。使用 GraphPad Prism 版本 8.01 (GraphPad Software, Inc.) 和 SPSS 24.0 軟件包 (IBM SPSS Statistics，版本 24.0) 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

圖 3. 吡啶和噻唑衍生物對(duì)肺癌 (A549) 細(xì)胞系的抑制作用[2]。

(1) 化合物制備：將合成的化合物及參考藥物阿霉素溶解于 DMSO 中。準(zhǔn)備不同濃度的工作溶液以供實(shí)驗(yàn)使用。

(2) 細(xì)胞處理：將預(yù)培養(yǎng)的細(xì)胞系暴露于不同濃度的測(cè)試材料，在 37°C 下孵育 24 小時(shí)。使用 PBS 清洗去除死細(xì)胞。

(3) MTT 染色：向每個(gè)孔加入 25 µL 0.5% MTT 染液。在 37°C 條件下孵育 3-4 小時(shí)。

(4) 溶解與讀數(shù)：加入 0.05 mL DMSO 溶解細(xì)胞內(nèi)形成的甲瓚晶體，并在搖床上放置 30 min。利用 ELISA 板讀數(shù)儀測(cè)量各孔的吸光度值。

? IC50 值的數(shù)據(jù)處理

• 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：進(jìn)行細(xì)胞或酶實(shí)驗(yàn)，將靶標(biāo) (如細(xì)胞系、酶等) 暴露于多個(gè)不同濃度的藥物中。

• 記錄數(shù)據(jù)：測(cè)量藥物對(duì)靶標(biāo)的抑制效果，例如細(xì)胞存活率、酶活性或代謝產(chǎn)物變化。

• 處理數(shù)據(jù)：將所得表格數(shù)據(jù)進(jìn)行轉(zhuǎn)化，使用 Graphpad prism 軟件計(jì)算—?jiǎng)?chuàng)建表格—輸入濃度和抑制率—點(diǎn)擊 Analyze，選擇對(duì)數(shù)變換--通過(guò)非線性回歸 (Non-linear regression) 對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合---得 IC50 值，其標(biāo)準(zhǔn)曲線為 S 型曲線。

圖 4. IC50 值的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

需要注意的是！雖然 IC50 的應(yīng)用十分廣泛，但 IC50 值是通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)獲得的，僅為體外數(shù)據(jù)，不能完-全反映藥物在體內(nèi)復(fù)雜環(huán)境下的效果。