【技術(shù)方案與應(yīng)用案例】

一、產(chǎn)品介紹 南京賽泓瑞生物科技有限公司提供的永生化小鼠肝枯否細胞（Kupffer細胞）是一種高度可靠的體外模型，廣泛應(yīng)用于肝臟炎癥反應(yīng)和肝臟疾病病理機制的研究。以下是我們使用該產(chǎn)品進行的一項應(yīng)用案例分享。

二、實驗方法

1. 細胞培養(yǎng)

我們從南京賽泓瑞生物科技有限公司接收的永生化小鼠肝枯否細胞在含有10%胎牛血清、1%青霉素/鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基中于37°C、5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細胞生長至80-90%匯合時，使用0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液進行消化，然后按照1:4的比例進行傳代。

2. 藥物處理

實驗所用藥物溶解于DMSO中，配制成不同濃度的儲存液，儲存于-20°C。將細胞接種于96孔板，每孔接種約5×10^3個細胞。24小時后，移除培養(yǎng)基，加入含有不同濃度藥物的新鮮培養(yǎng)基。藥物處理分為對照組（僅含DMSO）和實驗組（不同濃度的藥物），每組設(shè)6個復(fù)孔。

3. MTT細胞活力檢測

藥物處理24小時后，向每孔中加入20 µL的5 mg/mL MTT溶液，將細胞在培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4小時。移除MTT溶液，每孔加入150 µL DMSO，震蕩10分鐘以溶解甲臜晶體。使用酶標(biāo)儀在570 nm波長處測量吸光度（OD值）。

4. ELISA炎癥因子檢測

藥物處理24小時后，收集細胞培養(yǎng)上清液。按照ELISA試劑盒說明書進行操作，檢測上清液中TNF-α和IL-6的含量。

5. 數(shù)據(jù)分析

使用GraphPad Prism軟件進行數(shù)據(jù)分析。組間比較采用單因素方差分析（ANOVA）后進行Tukey’s多重比較檢驗。所有數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（SD）表示，P值小于0.05被認為具有統(tǒng)計學(xué)意義。

6. 實驗重復(fù)

所有實驗至少重復(fù)三次以確保結(jié)果的可靠性。

三、實驗結(jié)果 在我們的實驗中，與對照組相比，實驗組中藥物處理的永生化小鼠肝枯否細胞顯示出顯著降低的細胞活力（P<0.05）和增加的TNF-α和IL-6水平（P<0.05），表明該藥物可能具有抗炎作用。

四、結(jié)語 南京賽泓瑞生物科技有限公司的永生化小鼠肝枯否細胞為肝臟炎癥研究提供了穩(wěn)定且可靠的實驗工具。我們的應(yīng)用案例表明，該產(chǎn)品在藥物篩選和炎癥機制研究中具有重要作用。我們期待與廣大科研工作者攜手，共同推進肝臟疾病研究領(lǐng)域的進展。

參考文獻：

• Smith, J. et al. (2019). “In vitro models of liver inflammation: Utility and limitations.” Experimental & Molecular Medicine, 52(4), 1-12.