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超高效液相色譜是一種高效、快速的分析分離技術(shù)，通常由高壓溶劑輸送單元、低死體積的色譜系統(tǒng)、快速的檢測(cè)器、快速自動(dòng)進(jìn)樣器和高速數(shù)據(jù)采集、控制系統(tǒng)等組成。這些組件的協(xié)同作用，使得超高效液相色譜能夠?qū)崿F(xiàn)高效、快速、靈敏的分析分離。廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、環(huán)保、石化、食品、化工等行業(yè)。在醫(yī)藥領(lǐng)域，它可用于藥物分析、藥物代謝研究等；在環(huán)保領(lǐng)域，它可用于水質(zhì)監(jiān)測(cè)、空氣污染物分析等；在石化領(lǐng)域，它可用于石油產(chǎn)品分析、催化劑評(píng)價(jià)等；在食品和化工領(lǐng)域，它可用于食品添加劑檢測(cè)、產(chǎn)品質(zhì)量控制等。
超高效液相色譜的使用方法一般包括以下步驟：
1、儀器準(zhǔn)備
清潔：仔細(xì)清潔采樣室、進(jìn)樣器以及管道等部件，使用純凈溶劑清洗流道，確保系統(tǒng)無(wú)雜質(zhì)污染，同時(shí)檢查溶劑瓶和毛細(xì)管是否清潔，避免對(duì)樣品造成污染。
校準(zhǔn)：根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求選擇合適的校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)品，并按照制定的方法進(jìn)行準(zhǔn)備，確保校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量可靠、濃度準(zhǔn)確。
2、開(kāi)機(jī)與參數(shù)設(shè)置
開(kāi)啟儀器：依次打開(kāi)計(jì)算機(jī)、液相色譜儀主機(jī)電源開(kāi)關(guān)，等待儀器自檢完成。
設(shè)置參數(shù)：在工作站軟件中設(shè)置泵的流量、壓力上限，檢測(cè)器的波長(zhǎng)、靈敏度等參數(shù)。設(shè)置流動(dòng)相的比例、流速、柱溫等色譜條件，這些參數(shù)需要根據(jù)待分析的樣品和所選用的色譜柱來(lái)優(yōu)化確定。
3、樣品制備與進(jìn)樣
樣品制備：根據(jù)樣品的性質(zhì)和分析要求，對(duì)樣品進(jìn)行適當(dāng)?shù)奶幚?，如提取、過(guò)濾、稀釋等，以確保樣品溶液的濃度和純度符合分析要求，并且不會(huì)對(duì)色譜柱造成損害。
進(jìn)樣：將處理好的樣品溶液注入進(jìn)樣器中，注意進(jìn)樣量的控制，一般UPLC的進(jìn)樣量較小，通常在微升級(jí)別。可以使用手動(dòng)進(jìn)樣或自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣。
4、數(shù)據(jù)采集與分析
啟動(dòng)采集：點(diǎn)擊工作站軟件中的“開(kāi)始”按鈕，啟動(dòng)泵輸送流動(dòng)相，使樣品在色譜柱中分離，同時(shí)檢測(cè)器開(kāi)始采集數(shù)據(jù)。在數(shù)據(jù)采集過(guò)程中，要密切觀察基線的穩(wěn)定性和色譜峰的分離情況。
數(shù)據(jù)分析：數(shù)據(jù)采集完成后，使用工作站軟件對(duì)色譜圖進(jìn)行處理和分析。可以對(duì)色譜峰進(jìn)行積分、定性和定量分析，確定樣品中各組分的含量和身份。
5、關(guān)機(jī)與維護(hù)
關(guān)機(jī)：分析結(jié)束后，先關(guān)閉檢測(cè)器的電源，然后關(guān)閉泵的電源，最后關(guān)閉計(jì)算機(jī)。
清洗維護(hù)：使用合適的溶劑沖洗色譜柱和流路系統(tǒng)，以去除殘留的樣品和流動(dòng)相，防止堵塞和污染。定期對(duì)儀器進(jìn)行維護(hù)保養(yǎng)，檢查儀器的性能和部件的運(yùn)行狀況，及時(shí)更換磨損或損壞的部件。
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