土壤總磷/有機磷/無機磷含量測定試劑盒說明書

分光光度法 50 管/48 樣

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

土壤總磷包括有機磷和無機磷，其中無機磷能夠直接被植物利用。土壤有機磷經(jīng)過礦化分解而轉(zhuǎn)化為無機磷。同時測定土壤總磷、有機磷和無機磷，可以全面反映土壤磷營養(yǎng)狀況。

測定原理：

利用鉬藍法定磷。取一份土樣，通過浸提法測定土壤無機磷含量；另外取一份土樣，經(jīng)高溫灼燒后，土壤有機磷轉(zhuǎn)化為無機磷，測得土壤總磷含量；總磷含量減去無機磷含量，即可計算??有機磷含量。

試劑組成和配制：

試劑一：液體×1 瓶，4℃保存。臨用前用蒸餾水稀釋 10 倍后再用。

試劑三：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前配制，加入 20 ml 蒸餾水，充分溶解后加入 10 ml 試劑二，混勻。

標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1 支，20 μ mol/L 無機磷標(biāo)準(zhǔn)品，4℃保存。

自備儀器和用品：

可見分光光度計、臺式離心機、可調(diào)式水浴鍋，分析天平、可調(diào)式移液器、550℃高溫電爐，1ml 玻璃比色皿、蒸餾水、100 目篩子（可更?。?。

土壤不同形態(tài)磷提取：

1. 無機磷：稱取通過 100 目篩子的風(fēng)干土樣 0.1g，轉(zhuǎn)移到 10 ml 離心管，加入 10ml 試劑一，震蕩混勻，然后置于 45℃水浴 1h，8000g，25℃離心 10min，取上清液一，用于無機磷含量測定。

2. 總磷提取：取通過 100 目篩子的風(fēng)干土樣，550℃灼燒 1h，冷卻后稱取約 0.1g，轉(zhuǎn)移到 10 ml 離心管，加入 10ml 試劑一，震蕩混勻，然后置于 45℃水浴 1h，8000g，25℃，離心 10min，取上清液二，用于總磷含量測定。

測定步驟：

1. 分光光度計預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長到 660 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 打開水浴鍋，調(diào)節(jié)溫度到 40℃。

3. 空白管：取EP 管，依次加入 500μl 蒸餾水，500μl 試劑三，混勻后置于 40℃水浴保溫 10min，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測定吸光度，記為A 空白管。

4. 標(biāo)準(zhǔn)管：取EP 管，依次加入 50μl 標(biāo)準(zhǔn)液，450μl 蒸餾水，500μl 試劑三，混勻后置于 40℃水浴保溫 10min，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測定吸光度，記為A 標(biāo)準(zhǔn)管。

5. 測定管：取 EP 管，依次加入 50μl 上清液一或者上清液二，450μl 蒸餾水，500μl 試劑三，混勻后置于 40℃水浴保溫 10min，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測定吸光度，記為A 測定管。

注意事項:

1、空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。

2、試劑三配制過程中，可能會產(chǎn)生黑色固體，其不影響結(jié)果，注意吸取時不要將黑色固體吸入。

土壤磷含量計算：

1. 土壤無機磷含量（μmol /g）=[C 標(biāo)準(zhǔn)液×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)]×V 總÷W=0.2×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)÷W

C 標(biāo)準(zhǔn)液：20 μmol/L； W：土壤樣品質(zhì)量，g； V 總：上清液一總體積，10 ml=0.01 L。

2. 土壤總磷含量（μmol /g 干重）=[C 標(biāo)準(zhǔn)液×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)]×V 總

÷W=0.2×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)÷W

C 標(biāo)準(zhǔn)液：20 μmol/L；V 標(biāo)準(zhǔn)液：50μl=0.05 ml；W：土壤樣品質(zhì)量，g；V 總：上清液二總體積，10 ml=0.01 L。

3. 土壤有機磷（μmol /g）=土壤總磷-土壤無機磷