前言水光針是一種無創(chuàng)、無痛的微針美容項(xiàng)目，其主要成分通常包含透明質(zhì)酸鈉、氨基酸和維生素等。成年人在皮膚表層注射這些活性成分，可實(shí)現(xiàn)暫時(shí)性補(bǔ)水，并改善皮膚干燥、膚色暗沉等面部問題。水光針中添加氨基酸的主要作用是增強(qiáng)對(duì)肌膚的保濕和修復(fù)，而氨基酸的含量直接影響產(chǎn)品的效果。因此準(zhǔn)確測(cè)定水光針產(chǎn)品中的氨基酸非常重要。由于氨基酸結(jié)構(gòu)中不含紫外吸收官能團(tuán)，因此無法直接通過常規(guī)紫外檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)。目前很多標(biāo)準(zhǔn)中氨基酸的檢測(cè)主要采用衍生法，即，首先使用衍生化試劑（一般是 OPA、FMOC 等有紫外吸收的化合物）在堿性條件下對(duì)氨基酸進(jìn)行衍生，得到具有紫外吸收能力的衍生物，然后用紫外檢測(cè)器或者熒光檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)[1-3]。這種方法操作步驟相對(duì)復(fù)雜，且可能受到基質(zhì)干擾。也有標(biāo)準(zhǔn)方法利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)直接進(jìn)行檢測(cè)[4]，雖然能夠減小基質(zhì)干擾，提高選擇性，但檢測(cè)成本較高，不適用于對(duì)醫(yī)美產(chǎn)品的生產(chǎn)進(jìn)行監(jiān)控。本研究采用液相色譜串聯(lián)單四極桿質(zhì)譜系統(tǒng)，開發(fā)出一種能夠快速準(zhǔn)確地分析三種氨基酸的方法，一針運(yùn)行只需11min。與先前報(bào)道的衍生法相比，本文所述的方法無需衍生步驟，操作比較簡單；并且該方法抗基質(zhì)干擾能力較強(qiáng)，具有較高的靈敏度。

實(shí)驗(yàn)部分試劑和樣品甲醇、乙腈為色譜級(jí)，均購自安譜公司；乙酸銨為色譜級(jí)，購自Sigma公司；實(shí)驗(yàn)用水為 Millipore Milli-Q 超純水系統(tǒng)現(xiàn)制備的高純?nèi)ルx子水；氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品及水光針樣品由用戶提供。儀器和設(shè)備采用與 Agilent InfinityLab LC/MSD iQ（部件號(hào) G6160A）聯(lián)用的 Agilent 1260 Infinity II 液相色譜系統(tǒng)，該色譜系統(tǒng)配備如下安捷倫組件：Agilent 1260 Infinity II 四元泵（部件號(hào) G7111B）、Agilent 1260 Infinity II 自動(dòng)進(jìn)樣器（部件號(hào) G7129A）和 Agilent1260 Infinity II 柱溫箱（部件號(hào) G7116A）。標(biāo)準(zhǔn)溶液制備分別稱取適量脯氨酸、丙氨酸和甘氨酸標(biāo)準(zhǔn)品，溶于甲醇中，配制得到濃度為5500μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液；然后用甲醇進(jìn)一步稀釋，配制得到濃度分別為 1、5、10、20、40μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

樣品前處理取適量水光針樣品，用甲醇稀釋 10 倍，離心后，取上清液進(jìn)樣分析。色譜條件色譜柱： Amide色譜柱，4.6×150mm,3.5μm流速： 0.6mL/min進(jìn)樣量： 10μL柱溫： 30 °C流動(dòng)相 A： 水流動(dòng)相 B： 乙腈流動(dòng)相 C： 0.2mol/L乙酸銨水溶液梯度程序（如表 1）：

結(jié)果與討論本實(shí)驗(yàn)采用 Agilent 1260 Infinity II 液相色譜串聯(lián)單四極桿質(zhì)譜系統(tǒng)建立了脯氨酸、丙氨酸和甘氨酸的檢測(cè)方法（如圖 1）。使用該方法條件檢測(cè)三種氨基酸，在各自特征離子的 SIM 掃描下，獲得了較高的靈敏度，相互之間為干擾，有良好的專屬性。同時(shí)，該方法運(yùn)行時(shí)間僅需要11min，能夠快速完成大批量的樣品分析，獲得較高的樣品分析效率。

方法精密度取“標(biāo)準(zhǔn)溶液制備”項(xiàng)下的20μg/mL脯氨酸、丙氨酸和甘氨酸混標(biāo)溶液，重復(fù)進(jìn)樣 6 次，計(jì)算所得到的保留時(shí)間和峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 (RSD)，結(jié)果如下（如表 3）。從表中可以看出，三種氨基酸的保留時(shí)間 RSD 均小于 0.02%，峰面積 RSD 均小于 1.0%，表明該方法具有較高的精密度。

靈敏度利用所開發(fā)的方法對(duì)1μg/mL混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析，結(jié)果如下（圖 2）所示。此濃度下的脯氨酸、丙氨酸和甘氨酸的信噪比分別為2456、2336 和 1061。以此濃度及信噪比計(jì)算檢出限和定量限，三種氨基酸的結(jié)果如下：以 3 倍信噪比作為檢出限，則脯氨酸、丙氨酸、甘氨酸的檢出限分別為1.2ng/mL、1.3ng/mL、2.8ng/mL。以 10 倍信噪比作為定量限，則脯氨酸、丙氨酸、甘氨酸的檢出限分別為4.1ng/mL、4.3ng/mL、9.4ng/mL。上述結(jié)果表明，采用該方法測(cè)定該類型樣品中的三種氨基酸具有較高的靈敏度。

結(jié)論本實(shí)驗(yàn)采用 Agilent 1260 Infinity II 液相色譜串聯(lián)單四極桿質(zhì)譜系統(tǒng)，建立了醫(yī)美類樣品中脯氨酸、丙氨酸和甘氨酸的檢測(cè)方法。傳統(tǒng)氨基酸測(cè)試方法一般采用柱前或柱后衍生的方式，需要用到特殊的衍生試劑、專用的色譜柱及流動(dòng)相體系等，方法的復(fù)雜性較高，結(jié)果的重復(fù)性以及穩(wěn)定性也存在一定的問題。本方法與傳統(tǒng)的氨基酸衍生法相比屬于直接測(cè)定方法，不存在衍生操作，具有操作簡便、選擇性好和靈敏度高的特點(diǎn)，非常適合醫(yī)美類實(shí)際樣品中氨基酸的準(zhǔn)確定量。