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CT26結(jié)直腸癌模型皮下及原位小鼠構(gòu)建干貨

來源:上海雛田生物技術(shù)有限公司   2025年03月07日 23:37  

來源:醫(yī)研三人行


各位熱愛科研的小伙伴們,你是科研小白還是準(zhǔn)備上研一的師弟師妹們,戴師兄給你帶來一系列體內(nèi)腫瘤動物模型構(gòu)建及評價(jià)專題:CT26結(jié)直腸癌模型皮下及原位小鼠構(gòu)建。

PS:CT26細(xì)胞是一種源自小鼠的結(jié)腸癌細(xì)胞系,廣泛用于腫瘤學(xué)研究,尤其是在研究腫瘤免疫學(xué)和抗癌藥物測試中。

另外:同源CT26結(jié)直腸癌小鼠代表一種特征明確且廣泛使用的癌癥惡病質(zhì)模型 。腫瘤的生長導(dǎo)致身體和肌肉重量減輕,主要是通過增強(qiáng)脂肪和蛋白質(zhì)分解代謝。隨著腫瘤生長,還觀察到肝腫大和脾腫大,以及急性期反應(yīng)的激活和促炎細(xì)胞因子水平的升高。


01

寫在前面

皮下和原位腫瘤細(xì)胞動物模型的相同點(diǎn)

1)研究目的:兩種模型都用于研究腫瘤的生長、進(jìn)展、轉(zhuǎn)移機(jī)制,以及評估抗腫瘤藥物和治療方法的效果。

2)成瘤性:在兩種模型中,腫瘤細(xì)胞都能在宿主動物體內(nèi)生長形成腫瘤,并被用于評估腫瘤的生長速率、體積以及對治療的反應(yīng)。

皮下和原位腫瘤細(xì)胞動物模型的不同點(diǎn)

1)腫瘤植入位置不同:皮下腫瘤模型:將腫瘤細(xì)胞注射到動物的皮下組織中,通常選擇在背部或側(cè)腹部。原位腫瘤模型:將腫瘤細(xì)胞注射到原發(fā)腫瘤發(fā)生的器官或組織中(例如將結(jié)腸癌細(xì)胞注射到小鼠的結(jié)腸中)。

2)腫瘤微環(huán)境:皮下腫瘤模型:由于腫瘤細(xì)胞被植入到皮下組織中,其微環(huán)境與原發(fā)腫瘤的位置不同,因此可能不wan全反映出原發(fā)腫瘤的行為。原位腫瘤模型:腫瘤細(xì)胞被植入到其原發(fā)組織或器官中,因此更好地模擬了腫瘤的生理微環(huán)境,包括血供、基質(zhì)細(xì)胞、免疫細(xì)胞和局部信號分子。

3)其他:臨床相關(guān)性、腫瘤生長和轉(zhuǎn)移、操作難度的不同。


02

CT26結(jié)直腸癌模型皮下小鼠構(gòu)建

  • 實(shí)驗(yàn)材料

1)CT26細(xì)胞:常規(guī)復(fù)蘇后擴(kuò)增培養(yǎng),至少傳代2次后收獲對數(shù)生長期的細(xì)胞。

2)BALB/c小鼠:雄性:16~22g/6~8周齡(shou選);雌性:14~18g/6~8周齡。(注:適應(yīng)性飼養(yǎng)1周)

  • 實(shí)驗(yàn)方法

1)C26 細(xì)胞的生長和制備(注:為了實(shí)現(xiàn)更好的實(shí)驗(yàn)間重現(xiàn)性,盡可能收集傳代次數(shù)低的細(xì)胞)

2)小鼠準(zhǔn)備及麻醉:通過吸入異氟醚(氧氣 3%)麻醉小鼠。在進(jìn)行腫瘤接種所需的時(shí)間內(nèi)僅將動物保持在麻醉狀態(tài)。確保鼠放在加熱墊上,以防止身體熱量流失。在開始腫瘤注射之前,通過輕輕捏后腳趾來確認(rèn)適當(dāng)?shù)穆樽怼?/p>

3)使用無菌1 ml胰島素注射器和26號針頭,將0.2mL含有腫瘤細(xì)胞(500萬/只)的溶液快速注射到小鼠右側(cè)腋下的脂肪墊皮下。(注:對照動物將在相同位置接受0.2mL無菌鹽水溶液。)(注:細(xì)胞濃度通常為1×10^6~1×10^7個(gè)細(xì)胞/ml)

4)將動物放回籠子里。每 15 分鐘至少直接觀察一次鼠,直到它可以對溫和的操作做出反應(yīng)并恢復(fù)翻正反射,最后再放回籠子內(nèi)集中飼養(yǎng),確保提供足夠的水和食物。



03

CT26結(jié)直腸癌模型原位小鼠構(gòu)建

  • 實(shí)驗(yàn)材料

1)CT26細(xì)胞或者CT26瘤塊:細(xì)胞培養(yǎng)同上;瘤塊組織(直接用皮下成瘤的瘤塊進(jìn)行原位接種(1mm3左右的直徑大小))

2)基質(zhì)膠:Corning Matrigel是最chang用的基質(zhì)膠(基質(zhì)膠:細(xì)胞體積=1:1)

3)BALB/c小鼠:雄性:16~22g/6~8周齡(shou選);雌性:14~18g/6~8周齡。(注:適應(yīng)性飼養(yǎng)1周)

4)手術(shù)工具:手術(shù)刀、剪刀、鑷子、止血鉗、縫合針線等

  • 實(shí)驗(yàn)方法

1)小鼠準(zhǔn)備及麻醉:通過吸入異氟醚(氧氣 3%)麻醉小鼠。在進(jìn)行腫瘤接種所需的時(shí)間內(nèi)僅將動物保持在麻醉狀態(tài)。確保鼠放在加熱墊上,以防止身體熱量流失。在開始腫瘤注射之前,通過輕輕捏后腳趾來確認(rèn)適當(dāng)?shù)穆樽怼?/p>

2)準(zhǔn)備手術(shù)區(qū):剪除小鼠腹部毛發(fā),用碘伏和75%乙醇消毒手術(shù)區(qū)。

3)腹腔切口:在小鼠下腹部正中線沿腹白線做一小切口(約1~2 cm),切開皮膚和腹膜,暴露腹腔內(nèi)容物。(注:開口不要開太大,避免感染)

4)暴露結(jié)腸:小心分離并輕輕牽引結(jié)腸,確保不損傷周圍組織。

5)細(xì)胞注射:使用注射器(常用26或27號針頭)吸取預(yù)先準(zhǔn)備好的CT26細(xì)胞懸液。將注射器的針頭插入結(jié)腸壁,緩慢注射約50-100 μl的CT26細(xì)胞懸液。注射位置一般選擇結(jié)腸的中段或直腸靠近肛men處,以模擬人類直腸癌的發(fā)生位置。(確保細(xì)胞懸液均勻分布,并避免針頭穿透腸壁。)

或者瘤塊接種:用套管針將瘤塊注射結(jié)腸的中段或直腸靠近肛men處,以模擬人類直腸癌的發(fā)生位置。

6)縫合傷口:輕輕將結(jié)腸放回腹腔內(nèi),確保沒有捻轉(zhuǎn)或扭曲。用縫合針線將腹膜和皮膚分層縫合。

7)將動物放回籠子里。每 15 分鐘至少直接觀察一次鼠,直到它可以對溫和的操作做出反應(yīng)并恢復(fù)翻正反射,最后再放回籠子內(nèi)集中飼養(yǎng)。確保提供足夠的水和食物,并注意觀察術(shù)后可能出現(xiàn)的感染或不適癥狀。

8)腫瘤生長檢測:每隔2-3天觀察小鼠的體重、活動狀態(tài)和糞便情況。根據(jù)需要在適當(dāng)?shù)臅r(shí)間點(diǎn)(實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)為14天后)進(jìn)行小鼠的安le死,并解剖檢測原位腫瘤的生長情況和轉(zhuǎn)移情況。


04

實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)及注意事項(xiàng)

  1. 皮下腫瘤的觀察:在di一階段,腫瘤只能通過觸診來定位,并且表現(xiàn)為皮膚的小突起。在第二階段,觀察到腫瘤為皮下腫塊。極少數(shù)情況下,腫瘤會潰爛,導(dǎo)致開放性傷口;在這種情況下,小鼠被排除在實(shí)驗(yàn)組之外并被人道安le死。

  2. 如何提高腫瘤成瘤的重復(fù)率:動物品系、性別、腫瘤細(xì)胞的來源、傳代次數(shù)、注射細(xì)胞的數(shù)量以及注射位置,以上幾個(gè)方面重點(diǎn)關(guān)注。


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