1、目的

探討非最終滅菌注射劑生產過程中除菌過濾器對微生物的截留效果，確認過濾除菌工藝的有效性與安全性。

2、方法

采用孔徑為0.22 μm除菌級聚醚砜濾芯，以直徑在0.3～0.4 μm的缺陷假單胞菌為生物指示劑，將菌液用濾芯過濾，計算被過濾液體過濾前的微生物數(shù)量與過濾后的微生物數(shù)量比的常用對數(shù)值(LRV)。

3、結果

菌液過濾前后微生物數(shù)量比的常用對數(shù)值LRV大于7。

4、結論

濾芯每平方厘米有效過濾面積符合中國藥典2005年版2部附錄ⅩⅦ滅菌法的規(guī)定，確認除菌過濾工藝在注射劑生產過程中的有效性與安全性。  

除菌過濾器在藥品生產中主要用于無菌藥品的除菌過濾，除菌過濾是藥品生產過程中非常重要的一種除菌方式，特別是對非最終滅菌的注射劑而言，除菌過濾是消除藥液中微生物的方法。通過對除菌過濾器濾芯材質的選擇、滅菌方法、完整性測試以及細菌的截留試驗，確認除菌的效果，提高除菌過濾在注射劑生產過程中無菌保證程度重要性的認識。

一、材料與方法

1、試驗材料

(1)濾芯：濾膜材質為聚醚砜，10英寸226卡式，孔徑：0.22 μm，級別：除菌級，濾膜面積：3 600 cm2。來源：頗爾過濾器(北京)有限公司。(2)全自動過濾器完整性測試儀：上海先維過濾設備廠，型號：212A。(3)甘露醇：廣西南寧化學制藥有限公司，批號：0809110，配置20 kg 濃度為0.5%的水溶液。(4)微生物指示劑：缺陷假單孢菌(ATCC19146直徑0.3～0.4 μm)，北京鑫四環(huán)消毒技術開發(fā)中心。(5)菌液濃度：每平方厘米應達到107個菌的挑戰(zhàn)水平。(6)培養(yǎng)基：硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基：北京三藥科技開發(fā)公司，批號:081111；營養(yǎng)瓊脂：廣東環(huán)凱微生物科技有限公司，批號:200902081；營養(yǎng)肉湯：廣東環(huán)凱微生物科技有限公司，批號:200901071。(7)試驗壓力：約為0.2 Mpa。(8)試驗流量：筒式過濾器2～3.86L/(m3·min)。

2、方法

1.2.1 濾芯的清洗  

將濾芯浸泡于0.1%氫氧化鈉溶液中12～24 h，取出用注射用水反復沖洗至沖洗水的pH值呈中性。

1.2.2 完整性測試  

將過濾器與完整性測試儀連接，向經過注射用水充分浸潤的過濾器(含濾芯)中通入壓縮空氣，觀察壓力表讀數(shù)的變化，當浸入液面下的導管出口處出現(xiàn)第1個氣泡時，讀取壓力表指示值，此壓力值即為濾器濾芯的起泡點壓力，壓力要求≥0.31 Mpa。

1.2.3 缺陷假單胞菌液的制備  

取缺陷假單胞菌的新鮮培養(yǎng)物少許，接種至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，于(32.5±2.5)℃培養(yǎng)18～24 h，活菌計數(shù)將上述培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液制成含菌<100 CFU/mL的菌液，稀釋級別：107，計數(shù)結果：27 CFU/mL。

1.2.4 微生物截留試驗  

(1)過濾系統(tǒng)滅菌：將試驗所需的不銹鋼桶、硅膠管、過濾器及濾芯等置于脈動真空滅菌器中于121 ℃滅菌30 min。(2)對照試驗：取1 000 mL甘露醇溶液(0.5%)用無菌過濾器壓濾，各取2份樣品，分別用薄膜過濾法處理后，一份作陰性對照，另一份在最后1次沖洗液中加入缺陷假單胞菌菌液1 mL(<100 CFU/mL),取濾膜置于硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中培養(yǎng)作為陽性對照，對照試驗培養(yǎng)(33 ℃,14 d)均符合規(guī)定。(3)截留試驗：將缺陷假單胞菌液360 mL加入余量0.5%甘露醇溶液中攪拌均勻，取1 mL按中國藥典2005年版2部附錄Ⅺ J微生物限度檢查法進行檢查，計數(shù)過濾前液體的微生物數(shù)量。然后將菌液全部用過濾器濾過，取1 000 mL按過濾前藥液微生物數(shù)量檢查法同法操作，計數(shù)過濾后的液體的微生物數(shù)量。計算被過濾液體過濾前的微生物數(shù)量(N0)與過濾后的微生物數(shù)量(N)比的常用對數(shù)值,即：LRV=1gN01gN=7.8。(4)過濾后濾器的完整性測試將過濾之后的除菌濾器再次進行起泡點測試，確認試驗過程中濾膜的完整性。

二、結果

藥液過濾前的微生物的數(shù)量與藥液過濾后的微生物數(shù)量比的常用對數(shù)值為7.8，大于標準規(guī)定值7，結果見表1。證明除菌級濾芯可達到每平方厘米107個菌的截留效果，符合非最終滅菌注射劑的生產工藝要求。表1  微生物截留試驗結果（略）

三、討論

除菌過濾器微生物截留試驗結果表明，孔徑為0.22 μm除菌級濾芯對微生物的截留試驗可達到LRV大于7的微生物截留效果，達到除菌的目的。但是與其他滅菌方法相比，除菌過濾的風險，實際生產中宜安裝第2只已滅菌的除菌過濾器再過濾1次藥液，最終的除菌過濾器應盡可能接近灌裝點。因此，對于采用除菌過濾和無菌生產工藝生產的注射劑產品，在除菌過濾時，被過濾產品總的微生物污染量應控制在規(guī)定的限度內。要達到這一目的，應在無菌控制的環(huán)境下進行過濾操作，相關的設備、包裝容器、膠塞及其他物品應采用適當?shù)姆椒ㄟM行滅菌，并防止再次污染。對生產用原輔料還應進行微生物限度的檢查，以降低其微生物負載率，通過整個生產過程的嚴格控制，采用經驗證確認的除菌過濾和無菌生產的工藝，產品的無菌是能夠得到保證的。

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