你是否好奇科學(xué)家如何精確分析多肽、蛋白質(zhì)、聚合物甚至病毒顆粒的分子量？答案就藏在**體積排阻色譜（SEC）**的奇妙世界中！今天，讓我們揭開 SEC 固定相的神秘面紗，探索它如何成為實驗室的“分子尺子”！

SEC 的原理簡單卻強大——大分子先出，小分子后出！固定相由多孔填料組成，分子像“賽跑選手”一樣穿過孔道：

下圖所示為 SEC 色譜圖中化合物尺寸與洗脫的關(guān)系。一個常見的誤解是 SEC 基于分子量分離分子。大多數(shù)情況下確實是這樣，分子量較大的分析物通常會先洗脫。不過，更準確的說法是 SEC 基于流體力學(xué)體積分離分子，即分子在流動相或溶劑中的有效大小。

SEC 通常分為兩種不同的類型：

雖然 SEC 包括 GFC 和 GPC 兩種不同類型的分析，但大多數(shù)科學(xué)家并不對其進行區(qū)分?？茖W(xué)家經(jīng)常交換使用 GPC 和SEC。他們經(jīng)常會稱自己的工作為水相 GPC/SEC 或非水相 GPC/SEC，而不是 GPC 或 GFC。

固定相：硅膠 VS 聚合物，誰主沉浮？

SEC 色譜柱的固定相可以是硅膠基質(zhì)或聚合物基質(zhì)。硅膠基質(zhì)色譜柱與極性基團（通常為二醇）鍵合，以防止與分析物產(chǎn)生離子相互作用。聚合物基質(zhì)色譜柱使用疏水性或極性指數(shù)與樣品相似的聚合物填料。可以從下表的整理中發(fā)現(xiàn)，兩種固定相各有各的優(yōu)劣勢。

按照上述對比，我們可以大致得出一個寬泛的結(jié)論：高分辨率快速分離、以及常規(guī)分析可以優(yōu)選硅膠基質(zhì)，且緩沖液+硅膠柱的搭配更適合親水性生物分子（如蛋白）；對于極-端 pH 或有機溶劑條件，以及分析超大分子（如病毒顆粒、合成高分子）的時候，聚合物基質(zhì)更優(yōu)。

實戰(zhàn)技巧：如何玩轉(zhuǎn) SEC？

SEC 填料為全多孔，通過不同孔徑進行分離。孔的體積越大，SEC 填料的分離能力越強。排阻體積（Vo）對應(yīng)固定相孔排除的化合物洗脫所需的流動相體積?？倽B透體積（Vt）是尺寸足夠小、可以進入固定相孔的化合物洗脫所需的流動相體積?；衔锓蛛x發(fā)生在排阻體積與總滲透體積之間。這個體積用填料的總孔體積表示（參見下圖）。最終，SEC 填料的孔徑將決定色譜柱的排阻范圍，或排阻體積與滲透體積之間的對應(yīng)分子量范圍。

基于上述原理，在使用 SEC 的過程中，我們可以利用以下實用攻略：

需確保目標分子處于填料的線性分離區(qū)間（介于排阻極限與滲透極限之間），按照核心公式（經(jīng)驗法則）：

Phenomenex SEC 產(chǎn)品亮點

未來展望