1、使用賽多培®噬菌體抑制劑與現(xiàn)有噬菌體防治手段相比有哪些優(yōu)勢？

在生物醫(yī)藥（抗生素、疫苗、蛋白藥物、基因治療載體）、工業(yè)酶制劑、生物反應器工藝研究等依賴大規(guī)模細菌培養(yǎng)的領域，傳統(tǒng)防治噬菌體的方法（如設備消毒、菌種輪換）成本高且無法預防噬菌體污染，如果一旦發(fā)生噬菌體污染，會導致批次發(fā)酵失敗，造成大量物料損失和人工成本的浪費。傳統(tǒng)噬菌體消殺步驟繁瑣，且需要耗費大量時間，影響研發(fā)和生產(chǎn)進度。

賽多培®噬菌體抑制劑可以作為細菌培養(yǎng)的保護劑使用，盡最大可能保證發(fā)酵成功率，避免物料損失，同時減輕了環(huán)境消殺等成本。抑制劑作為直接添加的解決方案更便捷。

2、噬菌體抑制劑抑制噬菌體的原理是什么？抑制劑的添加會影響菌的生長和蛋白表達水平嗎？

賽多培®噬菌體抑制劑主要抑制噬菌體的生長繁殖。根據(jù)我們實驗驗證，進行大腸桿菌培養(yǎng)時，用富營養(yǎng)培養(yǎng)基例如TB培養(yǎng)基、2YT培養(yǎng)基、賽多培®增強型LB預混培養(yǎng)基、賽多培®大腸桿菌高密度表達培養(yǎng)基等，抑制劑的添加不會影響菌的正常生長。若使用普通LB培養(yǎng)基，因為營養(yǎng)不充分，噬菌體抑制劑的添加對菌的生長有抑制作用，可以嘗試用如下方案減小噬菌體抑制劑對菌的抑制作用：①延長細菌培養(yǎng)時間2-4h；②根據(jù)環(huán)境爆發(fā)的劇烈程度，嘗試減量使用；③通過增加溶氧的方式提高菌的生長速度；④若使用搖瓶培養(yǎng)，建議抑制劑在OD₆₀₀在0.8-1之間的時候添加噬菌體抑制劑，若使用發(fā)酵罐培養(yǎng)，菌生長到OD₆₀₀ 1-2左右再添加抑制劑，上述四種方案可以根據(jù)實際實驗需求組合使用。

噬菌體抑制劑的添加對蛋白的正常表達不會產(chǎn)生影響。

3、說明書中，噬菌體抑制劑的用量是一個范圍值，在使用時究竟按照什么比例添加？

通常情況下，每升培養(yǎng)基添加2毫升抑制劑液體（1000:2）即可顯著發(fā)揮抗噬菌體效果，保障菌體正常生長。
在噬菌體污染嚴重的環(huán)境中，或使用發(fā)酵罐進行高密度發(fā)酵時，為保證噬菌體抑制效果，每升培養(yǎng)基可添加6毫升抑制劑液體（1000:6）。

抑制劑在富營養(yǎng)的培養(yǎng)基中，最高可以加到10ml，LB培養(yǎng)基中可以最高加到6ml。建議2ml考慮的是使用成本問題以及菌體生長速率問題。我們的建議用量主要考慮使用成本、菌體生長速率以及噬菌體污染情況確定的。如果環(huán)境中噬菌體處于高爆發(fā)期間，建議增加用量。

4、加噬菌體抑制劑一點效果都沒有，什么原因？

添加噬菌體抑制劑沒有效果的原因有多種，經(jīng)過我們與客戶溝通，常見有如下原因：①搖瓶培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)過夜菌不長，大概率是菌種活性問題，同時也需要觀察是否存在培養(yǎng)條件失控、裝液量過大的情況；②環(huán)境中噬菌體爆發(fā)期，建議通過小型梯度實驗，摸索合適用量；③實驗室內部除了噬菌體之外，可能存在真菌、曲霉、金黃色葡萄球菌等雜菌污染，這就需要進行嚴格的消毒處理、執(zhí)行嚴格的無菌操作規(guī)范，以避免雜菌污染帶來的影響。

為此，我們根據(jù)實際操作經(jīng)驗，可以通過下面方法對培養(yǎng)體系的污染情況進行判斷：

如果只有細胞碎片，大概率是噬菌體污染；
如果OD₆₀₀值在1以下時菌出現(xiàn)死亡（菌體生長1-3小時，誘導前），則考慮感染烈性噬菌體；
如果OD₆₀₀值在1到2之間，誘導之后逐漸開始死亡（有些1-3小時，有些5小時左右），則考慮溫和噬菌體污染；
如果同時伴有白色絮狀物，或粘性的，或拉絲狀的，或蘑菇狀的，或有聚集狀白色的，則考慮伴隨雜菌污染。

5、添加抑制劑后，細菌在發(fā)酵罐中前期不生長或生長緩慢？

出現(xiàn)OD₆₀₀值到2-3后，不再增長時，請仔細檢查發(fā)酵罐罐壓是否穩(wěn)定，建議增加通氣量。

如果生長緩慢，那么建議抑制劑在OD₆₀₀ 1-2左右時進行添加。

環(huán)境惡劣的情況下，在誘導時進行抑制劑補加，具體用量視環(huán)境污染程度而定。

6、用發(fā)酵罐發(fā)酵時，添加了抑制劑，前期比較正常，但后期出現(xiàn)菌體死亡，這是什么原因？

出現(xiàn)這種情況，主要應對發(fā)酵操作過程進行排查。以下原因往往會導致發(fā)酵后期菌體死亡：

① 營養(yǎng)物質耗盡。發(fā)酵后期，碳源（如葡萄糖）、氮源（如銨鹽）或其他關鍵營養(yǎng)（如磷酸鹽、微量元素）可能耗盡，導致細菌無法維持代謝活動。主要表現(xiàn)為溶氧突然上升（細菌停止耗氧）、pH異常波動（代謝活動停滯）。
② 代謝產(chǎn)物積累。細菌代謝產(chǎn)生的副產(chǎn)物（如乳酸、乙酸、乙醇、氨、CO?等）可能達到毒性濃度，抑制生長甚至導致死亡。
③ 溶解氧（DO）不足或過量。
好氧菌：后期菌體密度高，需氧量大為增加，若供氧不足（攪拌或通氣不足），會導致缺氧死亡。兼性厭氧菌：過量溶氧可能誘導氧化應激反應（如自由基積累）。
④ pH失控。代謝產(chǎn)物（如有機酸、堿）導致pH超出菌種耐受范圍，影響酶活性和細胞膜穩(wěn)定性。
⑤ 溫度波動。發(fā)酵后期代謝產(chǎn)熱增加，若冷卻系統(tǒng)失效，溫度升高可能引起蛋白質變性或代謝紊亂。
⑥ 菌種自身問題。質粒丟失、基因突變或代謝途徑異常（如過度表達外源蛋白導致“代謝負擔”）。
⑦ 雜菌或噬菌體污染。雜菌競爭營養(yǎng)或分泌毒素。如果添加了噬菌體抑制劑，一般不會在后期出現(xiàn)噬菌體感染導致細菌裂解情況，但也存在因通氣帶來噬菌體持續(xù)性輸入，影響抑制劑效果，建議補加噬菌體抑制劑。

7、抑制劑是否再次滅菌？該如何添加？

賽多培®噬菌體抑制劑生產(chǎn)過程中，會進行0.22μm過濾除菌和高溫滅菌處理，無需再次滅菌?？梢园凑照f明書指導比例或實際需要的比例，直接加入到搖瓶或發(fā)酵罐的培養(yǎng)基（滅菌后）中，添加方式與抗生素相同。

8、噬菌體抑制劑大量使用一段時間后是否會產(chǎn)生抗藥性呢？

不會產(chǎn)生任何抗藥性，請放心使用。