手機版
化工儀器網(wǎng)手機版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關注視頻號
神經(jīng)生長因子（NGF）對交感神經(jīng)和感覺神經(jīng)元系統(tǒng)的發(fā)育和維持至關重要。NGF已被證實是一種復合物，由名為α、β和γ亞基的三種多肽組成。其中，亞基，β-NGF，是一種26.9kDa的蛋白質，含有241個殘基，參與神經(jīng)元的存活和分化。此外，β-NGF還是TRKA受體的配體，而 TRKA 受體是痛覺和溫覺神經(jīng)元分化和發(fā)育所的。
標記：
1.將細胞培養(yǎng)基與EdU溶液按照500：1的比例混合，制成2×EdU標記培養(yǎng)基。
2.提前將2×EdU標記培養(yǎng)基預熱，然后將150微升2×EdU標記培養(yǎng)基與等體積細胞培養(yǎng)基混合，獲得1×EdU溶液。
【注】：
①不建議替換全部培養(yǎng)基，這樣可能會影響細胞增殖的速度。
②配置好的培養(yǎng)基建議現(xiàn)用現(xiàn)配，用量以沒過細胞為宜。
3.孵育細胞2h，棄培養(yǎng)基。
【注】：
①培養(yǎng)時間取決于細胞的增殖速度和生長狀態(tài)。
②大多數(shù)腫瘤細胞以及粘附細胞系均可采用2h的孵育時間。
4.以1xPBS清洗細胞兩次，每次5min, 以除去未摻入DNA的EdU殘留。
【注】：
對于貼壁不牢的細胞可降低清洗強度。
實驗步驟：
1.將細胞以104-105個細胞/孔的密度接種在96孔板中，加入100μL培養(yǎng)基，含或不含待測化合物。在CO2培養(yǎng)箱中在37℃下培養(yǎng)細胞24小時。
2.向板中加入10μL不同濃度的待測物質。
3.在培養(yǎng)箱中將培養(yǎng)板培養(yǎng)適當時間（如6、12、24或48小時）。
4.向板的每個孔中加入10μL CCK-8溶液。小心不要將氣泡引入孔中。
5.將平板在培養(yǎng)箱中孵育1-4小時。
6.在讀板之前，在定軌振蕩器上輕輕混勻。
7.使用酶標儀測量450nm處的吸光度。
免責聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權或有權使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權使用作品的，應在授權范圍內使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關法律責任。
- 本網(wǎng)轉載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負責，不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉載時，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負版權等法律責任。
- 如涉及作品內容、版權等問題，請在作品發(fā)表之日起一周內與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關權利。
采購中心