精品国产亚洲国产亚洲,久热中文在线观看精品视频,成人三级av黄色按摩,亚洲AV无码乱码国产麻豆

產(chǎn)品推薦:氣相|液相|光譜|質(zhì)譜|電化學(xué)|元素分析|水分測(cè)定儀|樣品前處理|試驗(yàn)機(jī)|培養(yǎng)箱


化工儀器網(wǎng)>技術(shù)中心>儀器文獻(xiàn)>正文

歡迎聯(lián)系我

有什么可以幫您? 在線咨詢(xún)

磁性殼聚糖納米載體介導(dǎo)eNOS基因轉(zhuǎn)染血管平滑肌細(xì)胞研究

來(lái)源:威尼德生物科技(北京)有限公司   2025年03月19日 16:47  

摘要

磁性殼聚糖納米載體構(gòu)建了一種高效、低毒的eNOS基因遞送系統(tǒng),用于血管平滑肌細(xì)胞的靶向轉(zhuǎn)染。通過(guò)優(yōu)化載體制備工藝,結(jié)合磁靶向技術(shù),顯著提升了基因轉(zhuǎn)染效率并降低細(xì)胞毒性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,該載體可實(shí)現(xiàn)eNOS基因的穩(wěn)定表達(dá),且對(duì)細(xì)胞活性無(wú)顯著影響,為心血管疾病的基因治療提供了新策略。

引言

血管平滑肌細(xì)胞(VSMCs)的異常增殖與遷移是動(dòng)脈粥樣硬化、支架內(nèi)再狹窄等心血管疾病的核心病理機(jī)制。內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)可通過(guò)催化一氧化氮(NO)生成,抑制VSMCs過(guò)度增殖并改善血管內(nèi)皮功能。然而,傳統(tǒng)基因遞送載體(如病毒或脂質(zhì)體)存在免疫原性高、靶向性差等問(wèn)題,限制了其臨床應(yīng)用。

近年來(lái),殼聚糖基納米載體因其良好的生物相容性和可修飾性備受關(guān)注。磁性納米顆粒的引入可借助外部磁場(chǎng)實(shí)現(xiàn)靶向遞送,減少基因藥物的非特異性分布。本研究通過(guò)將磁性Fe?O?納米顆粒與殼聚糖復(fù)合,構(gòu)建磁性殼聚糖納米載體(MCNPs),并負(fù)載eNOS質(zhì)粒DNA,系統(tǒng)評(píng)估其對(duì)VSMCs的轉(zhuǎn)染效率及生物安全性,旨在為基因治療提供一種新型高效遞送平臺(tái)。

實(shí)驗(yàn)部分

1. 磁性殼聚糖納米載體(MCNPs)的制備與表征

材料:殼聚糖(某試劑,脫乙酰度≥95%)、FeCl?·6H?O(某試劑)、三聚磷酸鈉(某試劑)。

 

合成步驟

1. 采用共沉淀法制備Fe?O?磁性納米顆粒:將Fe3?與Fe2?按2:1摩爾比混合,滴加氨水至pH=10,60℃攪拌1小時(shí),磁分離后洗滌干燥。

 

2. 將Fe?O?分散于殼聚糖醋酸溶液中(濃度2% w/v),加入三聚磷酸鈉交聯(lián),通過(guò)離子凝膠法形成MCNPs。

表征

1. 粒徑與電位:動(dòng)態(tài)光散射儀(某品牌)測(cè)得MCNPs平均粒徑為150±5 nm,Zeta電位+35 mV。

 

2. 磁響應(yīng)性:振動(dòng)樣品磁強(qiáng)計(jì)(某品牌)顯示飽和磁化強(qiáng)度為45 emu/g,表明其具備良好磁靶向能力。

 

3. 結(jié)構(gòu)分析:傅里葉紅外光譜(某品牌)證實(shí)Fe?O?與殼聚糖成功復(fù)合。

2. eNOS質(zhì)粒負(fù)載與釋放

1. 質(zhì)粒負(fù)載:將eNOS-pDNA(某試劑)與MCNPs按質(zhì)量比1:20混合,通過(guò)靜電吸附結(jié)合。瓊脂糖凝膠電泳(威尼德電泳儀)驗(yàn)證負(fù)載效率達(dá)90%以上。

 

2. 體外釋放:在pH 7.4的PBS中,48小時(shí)內(nèi)釋放率低于20%,表明載體具備緩釋特性。

3. 細(xì)胞培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)

1. 細(xì)胞來(lái)源:大鼠主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞(某試劑),培養(yǎng)于含10%胎牛血清(某試劑)的DMEM培養(yǎng)基。

 

2. 轉(zhuǎn)染流程

將負(fù)載eNOS的MCNPs與細(xì)胞共孵育4小時(shí),施加0.3 T外部磁場(chǎng)(某品牌)引導(dǎo)載體富集于細(xì)胞表面。

 

使用威尼德電穿孔儀(參數(shù):電壓100 V,脈沖時(shí)長(zhǎng)5 ms)增強(qiáng)細(xì)胞膜通透性。

 

轉(zhuǎn)染48小時(shí)后,收集細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)分析。

 

3. 對(duì)照組:設(shè)置空載體組、裸DNA組及Lipofectamine 3000(某試劑)組。

4. 轉(zhuǎn)染效率與功能檢測(cè)

1. 熒光定量PCR:采用SYBR Green法(某試劑)檢測(cè)eNOS mRNA表達(dá),轉(zhuǎn)染組表達(dá)量較對(duì)照組提高8倍。

 

2. Western BloteNOS蛋白表達(dá)水平顯著上調(diào),NO生成量(Griess試劑法)增加3.5倍。

 

3. 細(xì)胞活性CCK-8法顯示,MCNPs組細(xì)胞存活率>95%,顯著高于脂質(zhì)體組(78%)。

5. 生物相容性與毒性評(píng)估

1. 溶血實(shí)驗(yàn)MCNPs在2 mg/mL濃度下溶血率<5%,符合生物材料標(biāo)準(zhǔn)。

 

2. 炎癥因子檢測(cè)ELISA法顯示IL-6、TNF-α水平與空白組無(wú)顯著差異。

結(jié)果與討論

磁靶向性與基因負(fù)載能力的MCNPs載體。相較于傳統(tǒng)脂質(zhì)體,其轉(zhuǎn)染效率提升約40%,且細(xì)胞毒性顯著降低。磁場(chǎng)引導(dǎo)結(jié)合電穿孔技術(shù)可協(xié)同增強(qiáng)基因遞送效率,減少載體用量。eNOS的持續(xù)表達(dá)有效抑制了VSMCs增殖(劃痕實(shí)驗(yàn)顯示遷移率降低60%),表明該體系在血管重塑治療中具有潛在應(yīng)用價(jià)值。

此外,殼聚糖的陽(yáng)離子特性與Fe?O?的磁響應(yīng)性實(shí)現(xiàn)了載體功能的雙重優(yōu)化,未來(lái)可通過(guò)表面修飾(如PEG化)進(jìn)一步提升其循環(huán)穩(wěn)定性與靶向精度。

結(jié)論

磁性殼聚糖納米載體能夠高效介導(dǎo)eNOS基因轉(zhuǎn)染血管平滑肌細(xì)胞,兼具高轉(zhuǎn)染效率與低生物毒性,為心血管疾病的基因治療提供了創(chuàng)新性解決方案。后續(xù)研究將聚焦于體內(nèi)靶向遞送效果及長(zhǎng)期安全性評(píng)估。

參考文獻(xiàn)

1. 內(nèi)皮型一氧化氮合酶腺病毒表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定[J].陸平;蔡文瑋;盛凈;劉德莉;夏萬(wàn)堯;劉偉,上海交通大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版.2004,第9期

2. eNOS基因體外轉(zhuǎn)染對(duì)大鼠頸總動(dòng)脈球囊損傷后血管平滑肌細(xì)胞增殖規(guī)律的影響[J].蔡文瑋;陸平;盛凈,中國(guó)微循環(huán).2005,第4期

3. 納米混懸劑的應(yīng)用及體內(nèi)外行為研究進(jìn)展[J].蒲曉輝;張曉;孫進(jìn);何仲貴,東南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版).2011,第4期

4. Adenoviral gene therapy.[J].Hunt KellyK;Vorburger StephanA,The oncologist.2002,第1期

5. Biomedical applications of superparamagnetic iron oxide nanoparticles encapsulated within chitosan[J].Hyo Sook Lee;Eun Hee Kim;Yangkyu Ahn,Journal of Alloys & Compounds: An Interdisciplinary Journal of Materials Science & Solid-state Chemistry & Physics.2007,第0期

6. Development and application of adenoviral vectors for gene therapy of cancer.[J].Zhang WW,Cancer gene therapy.1999,第2期


免責(zé)聲明

  • 凡本網(wǎng)注明“來(lái)源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來(lái)源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
  • 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來(lái)源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé),不承擔(dān)此類(lèi)作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí),必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來(lái)源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
  • 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問(wèn)題,請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
企業(yè)未開(kāi)通此功能
詳詢(xún)客服 : 0571-87858618
亚洲欧美激情自拍色图-国产亚洲精品sese在线播放| 两性污污视频网站在线观看-亚洲欧美日韩激情一区| 国产av一区二区三区日韩接吻-av网址在线播放网站| 九九热这里只有精品九九-欧美日韩人妻精品一二三| 狠狠狠狠爱精品一二三四区-l舌熟女av国产精品| 国产av剧情护士麻豆-三级国产精品欧美在线观看| 日韩亚洲一区二区三区av-欧美综合在线观看一区二区三区| 国产精品美女在线网址-久草免费福利在线观看视频| 国产欧美成人精品第一区-日本黄色精品一区二区| 欧美mv日韩mv视频-熟妇人妻ⅴa精品中文| 日韩二级视频在线观看-美女扒开奶罩露出奶子的视频网站| 免费午夜福利视频在线观看-亚洲成人日韩欧美伊人一区| 蜜臀av日日欢夜夜爽一区-av在线免费永久播放| 国产高清av免费在线观看-黄片毛片大全一区二区三区| 五月婷婷免费观看视频-男人操女人下面视频在线免费看| 熟女少妇免费一区二区-麻豆一区二区三区免费在线观看| 天天干天天天天天天天-亚洲综合av在线三区| 婷婷综合在线视频观看-亚洲一区二区三区香蕉| 日韩精品一区二区三区十八-日韩人妻少妇一区二区三区| 亚洲永久免费在线观看-亚洲欧美导航一区二区导航| 亚洲午夜久久久精品影院-性感美女在线观看网站国产| 看肥婆女人黄色儿逼视频-秋霞电影一区二区三区四区| 欧美一级二级三级在线看-日韩精品欧美嫩草久久99| 精彩亚洲一区二区三区-中文字幕中文字幕在线色站| 久久网址一区二区精品视频-日产国产欧美视频一区精品| 欧美日韩国产亚洲免费-肉体粗喘娇吟国产91| 国语自产偷拍精品视频偷拍-国产伊人这里只有精品视频| 亚洲欧美日韩国产一区二区三区-国产欧美日韩一区二区免费| 国产精品一区二区在线免费-久久精品国产亚洲av热明星| 国产在线观看高清精品-四季av一区二区三区中文字幕| 午夜福利卫生纸福利院-一区二区三区久久亚洲| 天天干天天干2018-91人妻人人澡人爽精品| 国产免费高清av在线播放-成年人在线播放中文字幕| 中文不卡一区二区三区-老司机在线老司机在线一区| 国产精品二区高清在线-91精品91久久久久久| 国产欧美日韩中文字幕在线-国产伊人一区二区三区四区| 亚洲国产日韩精品四区-dy888午夜福利精品国产97| 熟女少妇免费一区二区-麻豆一区二区三区免费在线观看| 亚洲一区二区免费av-中文字幕人妻久久久一区二区三区| 欧美精品一区二区不卡-精品国产一区二区三区香蕉网址| 麻豆久久国产精品亚洲-日本理论中文字幕在线视频|