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精品推薦 | 極速體驗(yàn)！Superfast-BS轉(zhuǎn)化，半小時(shí)輕松搞定~
隨著分子檢測的不斷發(fā)展，甲基化qPCR檢測以及甲基化NGS檢測已成為非常普及的檢測技術(shù)，這兩種技術(shù)的必經(jīng)之路就是甲基化轉(zhuǎn)化，甲基化轉(zhuǎn)化從方法學(xué)上可分為亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化和酶法轉(zhuǎn)化，近幾年，基于DNA甲基化位點(diǎn)的檢測試劑盒陸續(xù)獲批面世。NMPA批準(zhǔn)的甲基化檢測試劑盒大部分為熒光PCR法，主要原因在于熒光PCR法操作簡便，無需在PCR后電泳，且具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好等特點(diǎn)。這些甲基化檢測試劑采用的轉(zhuǎn)化方法為亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化法，亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化成為DNA甲基化檢測的“金標(biāo)準(zhǔn)”。但是傳統(tǒng)的亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化有很多局限性，例如過長的轉(zhuǎn)化時(shí)間、嚴(yán)重的DNA損傷、被高估的5mC水平、C-U轉(zhuǎn)化不全等。
圖1.亞硫酸氫鹽催化C轉(zhuǎn)化為U的化學(xué)反應(yīng)概要
甲基化檢測技術(shù)在疾病早篩領(lǐng)域持續(xù)火爆，2024-2025 年獲國家藥監(jiān)局最新批準(zhǔn)的甲基化檢測試劑盒如下：
思博士 ® MT-1A、Epo 及 Septin9 基因甲基化檢測試劑盒（PCR 熒光探針法）2：2024 年 8 月 7 日獲批（國械注準(zhǔn) 20243401386），由博爾誠（北京）科技有限公司自主研發(fā)，是 NMPA 批準(zhǔn)上市的食管癌血液基因甲基化檢測產(chǎn)品，可通過測定外周血中腫瘤 DNA 特定位點(diǎn)（MT-1A、Epo 及 Septin9 基因）的甲基化程度，僅需 5ml 外周血即可實(shí)現(xiàn)食管癌的高效精準(zhǔn)檢出。
人 CDO1 和 CELF4 基因甲基化檢測試劑盒（PCR - 熒光探針法）10：2024 年 12 月 17 日獲批（國械注準(zhǔn) 20243402610），由北京起源聚禾生物科技有限公司研發(fā)，用于體外定性檢測人宮頸脫落細(xì)胞 DNA 中 CDO1 和 CELF4 基因的甲基化水平。
艾思寧 ®——KCNA3 和 OTOP2 基因甲基化聯(lián)合檢測試劑盒（熒光 PCR 法）：2025 年 1 月 21 日獲批（國械注準(zhǔn) 20253400207），由武漢艾米森自主研發(fā)，基于實(shí)時(shí)熒光 PCR 技術(shù)，通過檢測血液 ctDNA 中的 OTOP2 和 KCNA3 基因甲基化程度實(shí)現(xiàn)對食管癌的早期檢測。
人 Twist1/Vimentin 基因甲基化檢測試劑盒（熒光 PCR 法）：2025 年 1 月獲批（國械注準(zhǔn) 20253400083），由江蘇為真生物醫(yī)藥技術(shù)股份有限公司研發(fā)，針對癌種為尿路上皮癌。
GNB4 和 Riplet 基因甲基化聯(lián)合檢測試劑盒（熒光 PCR 法）：2025 年 1 月獲批（國械注準(zhǔn) 20253400101），由武漢艾米森生命科技有限公司研發(fā)，針對癌種為肝癌。
人類 Septin9、SDC2 和 NDRG4 基因甲基化檢測試劑盒（熒光 PCR 法）6：2025 年 3 月 6 日獲批（國械注準(zhǔn) 20253400481），由江蘇健為診斷科技有限公司研發(fā)，用于體外定性檢測人糞便樣本 DNA 中 Septin9、SDC2 和 NDRG4 基因的甲基化狀態(tài)，對判斷患者結(jié)直腸癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行輔助診斷。
人 CDO1/AJAP1/GALR1 基因甲基化檢測試劑盒（熒光 PCR 法）1：2025 年獲批，由武漢凱德維斯生物技術(shù)有限公司研發(fā)，對人宮腔脫落細(xì)胞樣本中基因甲基化狀態(tài)進(jìn)行定性檢測，用于疑似子宮內(nèi)膜癌患者的輔助診斷。
2024年1月2日，芝加哥大學(xué)何川教授團(tuán)隊(duì)在Nature Biotechnology上在線發(fā)表了題為Ultrafast bisulfite sequencing detection of 5?methylcytosine in DNA and RNA的研究論文，該研究提出并開發(fā)了對DNA和RNA上的5-甲基胞嘧啶修飾進(jìn)行快速，準(zhǔn)確檢測的測序方法，簡稱為UBS-seq。該技術(shù)比現(xiàn)有的轉(zhuǎn)化反應(yīng)過程加速20-30倍，同時(shí)明顯的降低了DNA損傷，以及C-U轉(zhuǎn)化不che底導(dǎo)致的背景干擾。
圖2.UBS-seq法在微量樣本中應(yīng)用，傳統(tǒng)BS轉(zhuǎn)化相比有更低的背景噪音
傳統(tǒng)BS轉(zhuǎn)化的不足之處和Superfast BS-seq的優(yōu)勢有哪些呢？
傳統(tǒng)BS-seq:
轉(zhuǎn)化液濃度低，反應(yīng)時(shí)間長，約3 h；
在高 GC DNA 區(qū)域轉(zhuǎn)化不充分；
DNA降解嚴(yán)重；
非甲基化區(qū)域優(yōu)先降解。
Superfast BS-seq
轉(zhuǎn)化液濃度高，轉(zhuǎn)化時(shí)間短，約5min；
DNA降解程度低，轉(zhuǎn)化后樣本完整度好；
GC區(qū)域轉(zhuǎn)化率高，假陽性率低。
翌圣生物的Hieff® Superfast DNA Methylation Bisulfite Kit（柱式：12225ES）和Hieff® Mag Superfast DNA Methylation Bisulfite Kit（磁珠法：12227ES）便是基于此技術(shù)開發(fā)優(yōu)化而成，可以在98°C 5min條件下可完成＞99.5%的胞嘧啶轉(zhuǎn)化，并且極大的降低了DNA損傷，更好的保證了DNA片段的完整性，約30 min可完成BS轉(zhuǎn)化全流程，轉(zhuǎn)化后的產(chǎn)物適用于PCR擴(kuò)增和DNA測序等下游應(yīng)用。
實(shí)驗(yàn)流程
圖3.Superfast BS轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)流程
產(chǎn)品亮點(diǎn)
產(chǎn)品亮點(diǎn)一：
優(yōu)異的轉(zhuǎn)化率
投入不用量的293gDNA，293gDNA參入0.5% λ DNA，使用12227（磁珠法）與競品1轉(zhuǎn)化試劑盒進(jìn)行頭對頭對比，同時(shí)采用雙鏈甲基化DNA建庫（12214ES），如圖4所示：12227（磁珠法）對不同投入量的DNA中 λ DNA C的轉(zhuǎn)化率≥99.5%，轉(zhuǎn)化時(shí)間適當(dāng)延長，能進(jìn)一步提高轉(zhuǎn)化效率。
圖4.12227和競品的轉(zhuǎn)化率
產(chǎn)品亮點(diǎn)二：優(yōu)異的樣本兼容率
10 ng cf DNA和50 ng FFPE DNA，cf DNA和FFPE DNA都參入0.5% λ DNA，使用12227（磁珠法）與競品1轉(zhuǎn)化試劑盒進(jìn)行頭對頭對比，同時(shí)采用雙鏈甲基化DNA建庫（12214ES），如圖5所示：12227（磁珠法）對不同樣本中 λ DNA C的轉(zhuǎn)化率≥99.5%，轉(zhuǎn)化時(shí)間適當(dāng)延長，能進(jìn)一步提高轉(zhuǎn)化效率。
圖5
產(chǎn)品亮點(diǎn)三：
優(yōu)異的回收率
投入不同量的293 DNA，使用12225和12227與競品1轉(zhuǎn)化試劑盒進(jìn)行頭對頭對比，轉(zhuǎn)化后采用Qubit ssDNA定量，計(jì)算回收率，如圖6所示：12225的樣本回收率能穩(wěn)定達(dá)到60%以上，并且當(dāng)樣本量大于200 ng，回收率能超過70%，磁珠法轉(zhuǎn)化試劑在高投入量下，回收率略低于柱式法，1 μg以內(nèi)，磁珠法的回收率能達(dá)到60%。
圖6.競品1為磁珠法
產(chǎn)品亮點(diǎn)四：適用于單細(xì)胞甲基化建庫
在微流控的自動(dòng)化單細(xì)胞DNA甲基化平臺上，進(jìn)行單細(xì)胞甲基化轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，樣本中單細(xì)胞DNA轉(zhuǎn)化率在99%左右。
產(chǎn)品推薦
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品貨號 |
Hieff® Superfast DNA Methylation Bisulfite Kit超快速DNA亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化試劑盒（柱式） | 12225ES |
Hieff® Mag Superfast DNA Methylation Bisulfite Kit超快速DNA亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化試劑盒（磁珠法） | 12227ES |
翌圣DNA甲基化解決方案
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