細胞因子實驗過程如何完成標記任務

來源：上海一研生物科技有限公司 2025年03月27日 09:19

巨噬細胞集落刺激因子（M-CSF）是一種19.02kDa的造血生長因子，含有162個氨基酸殘基。該蛋白的活性：形式為同源二聚體，由成骨細胞分泌。M-CSF可控制單核細胞、巨噬細f胞和骨髓祖細胞的生成、分化和功能。M-CSF能夠通過結(jié)合其受體CSF-1R激活CSF-1信號通路。

標記：

1.將細胞培養(yǎng)基與EdU溶液按照500：1的比例混合，制成2×EdU標記培養(yǎng)基。

2.提前將2×EdU標記培養(yǎng)基預熱，然后將150微升2×EdU標記培養(yǎng)基與等體積細胞培養(yǎng)基混合，獲得1×EdU溶液。

【注】：

①不建議替換全部培養(yǎng)基，這樣可能會影響細胞增殖的速度。

②配置好的培養(yǎng)基建議現(xiàn)用現(xiàn)配，用量以沒過細胞為宜。

3.孵育細胞2h，棄培養(yǎng)基。

【注】：

①培養(yǎng)時間取決于細胞的增殖速度和生長狀態(tài)。

②大多數(shù)腫瘤細胞以及粘附細胞系均可采用2h的孵育時間。

4.以1xPBS清洗細胞兩次，每次5min, 以除去未摻入DNA的EdU殘留。

【注】：對于貼壁不牢的細胞可降低清洗強度。

實驗步驟：

1.將細胞以104-105個細胞/孔的密度接種在96孔板中，加入100μL培養(yǎng)基，含或不含待測化合物。在CO2培養(yǎng)箱中在37℃下培養(yǎng)細胞24小時。

2.向板中加入10μL不同濃度的待測物質(zhì)。

3.在培養(yǎng)箱中將培養(yǎng)板培養(yǎng)適當時間（如6、12、24或48小時）。

4.向板的每個孔中加入10μL CCK-8溶液。小心不要將氣泡引入孔中。

5.將平板在培養(yǎng)箱中孵育1-4小時。

6.在讀板之前，在定軌振蕩器上輕輕混勻。

7.使用酶標儀測量450nm處的吸光度。

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