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重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)(RPA)凍干簡介

來源:蓓迪(北京)科技有限公司   2025年03月31日 08:50  

重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)(Recombinase Polymerase Amplification,RPA)能夠在 恒溫條件下(37℃-42℃)實(shí)現(xiàn)對核酸的快速特異性擴(kuò)增,且在20min內(nèi)可將核酸擴(kuò)增至可檢 測水平,具有良好的可操作性,能夠在非實(shí)驗(yàn)室條件下完成核酸檢測,被稱為是具有可替代PCR潛力的核酸檢測技術(shù),且可以和瓊脂糖凝膠檢測、熒光檢測技術(shù)結(jié)合實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)、快速甚至定量檢測。常溫等溫,是指維持在某一特定的溫度,溫度為22-42℃,接近常溫,溫度保持恒定,因?yàn)檫@種反應(yīng)對設(shè)備的要求比較低,更適合應(yīng)用于POCT或者即時(shí)診斷。

常規(guī)的RPA檢測試劑需低溫保存、運(yùn)輸,并且反復(fù)凍融會影響性能的穩(wěn)定。因此,開發(fā)常溫下穩(wěn)定保存、便于運(yùn)輸?shù)脑嘡PA劑至關(guān)重要。將RPA檢測試劑制備成為凍干試劑是解決上述問題的可行思路。然而,RPA與CRISPR檢測試劑是一種成分復(fù)雜的組合物,特別是凍干的RPA試劑與凍干的CRISPR試劑再反應(yīng)過程中會混合為一個(gè)體系,其成分進(jìn)一步復(fù)雜化,包含DNA、RNA和酶、凍干成分等物質(zhì)。因而,在開發(fā)具體的檢測試劑過程中,如何改進(jìn)凍干試劑的組成,特別是如何設(shè)置凍干保護(hù)劑的組成,進(jìn)而保證檢測試劑的穩(wěn)定性,避免其性能降低,這是一個(gè)重要的問題。

RPA試劑包含緩沖液,重組酶、DNA 聚合酶、逆轉(zhuǎn)錄酶、dNTP 、ATP和PEG 35000等。在常溫下實(shí)現(xiàn)反應(yīng)。

   1. 緩沖液:緩沖液是RPA試劑中常見的成分之一,它有助于維持反應(yīng)體系的pH值穩(wěn)定,從而確保反應(yīng)的準(zhǔn)確性和可靠性。

2. 酶:酶是RPA試劑中的關(guān)鍵成分,包含重組酶,DNA聚合酶、逆轉(zhuǎn)錄酶等,它們負(fù)責(zé)催化特定的化學(xué)反應(yīng)。

3. 引物:引物是用于PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))等反應(yīng)的特異性DNA片段,它們幫助擴(kuò)增目標(biāo)DNA序列。包括一對或者多對引物。

4. 熒光染料:用于實(shí)時(shí)PCR等需要熒光檢測的技術(shù)中,幫助實(shí)時(shí)監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程。

由于RPA試劑包含多重成分,成分復(fù)雜,如各種酶,相互耐受溫度,環(huán)境都不一樣,保存條件很苛刻,而凍干成為解決保存的方法之一。凍干法是采用低溫升華的方法,這種情況下不改變物質(zhì)的特性,降低到很低的含水量,鎖住物質(zhì)本身的活性,復(fù)溶后恢復(fù)活性,獲得液體狀態(tài)下或者物質(zhì)本身的新鮮狀態(tài)。而RPA試劑凍干不同于常規(guī)的PCR試劑,由于其成分復(fù)雜,因此凍干保護(hù)劑和凍干曲線需要摸索。我公司在開發(fā)過程中建立了各種試劑的凍干保護(hù)體系和凍干曲線,購買任意一款硅油循環(huán)凍干機(jī),我公司都可以提供免費(fèi)的凍干技術(shù)協(xié)助。歡迎資料RPA凍干試劑凍干設(shè)備,凍干微球成型儀,微球分裝機(jī)。


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