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白喉棒狀桿菌毒素ELISA檢測(cè)試劑盒的方法
白喉棒狀桿菌毒素ELISA檢測(cè)試劑盒通常采用雙抗原夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA），具體操作步驟如下：
一、檢測(cè)原理
通過(guò)預(yù)先包被白喉棒狀桿菌抗原的微孔板，依次加入待測(cè)樣本、辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)溫育后徹底洗滌，加入底物TMB顯色。TMB在過(guò)氧化物酶催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色，最終在酸作用下變?yōu)辄S色，通過(guò)酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），與CUTOFF值比較，判定樣本中白喉棒狀桿菌毒素抗體的存在。
二、操作步驟
樣本準(zhǔn)備
血清/血漿：收集后3000轉(zhuǎn)離心10分鐘分離血清或血漿，避免溶血和高脂樣本。
保存條件：若不立即檢測(cè)，樣本需分裝后凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，室溫解凍并充分混勻。
試劑準(zhǔn)備
試劑盒平衡：試劑盒于2-8℃保存，使用前室溫平衡20分鐘。
洗滌液稀釋?zhuān)簼饪s洗滌液用蒸餾水按1:20或1:50稀釋?zhuān)ǜ鶕?jù)試劑盒說(shuō)明）。
加樣與溫育
設(shè)置對(duì)照孔：陰、陽(yáng)性對(duì)照孔各加入50μL對(duì)照液。
樣本孔：加入50μL稀釋后的樣本。
加入檢測(cè)抗體：每孔加入100μLHRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴或恒溫箱溫育60分鐘。
洗滌
棄去液體，每孔加滿洗滌液，靜置1分鐘后甩去，重復(fù)5次（或用洗板機(jī)洗滌）。
顯色與終止
每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15分鐘。
每孔加入50μL終止液，15分鐘內(nèi)于450nm波長(zhǎng)測(cè)定OD值。
三、結(jié)果判斷
試驗(yàn)有效性
陽(yáng)性對(duì)照孔OD值平均值≥1.00，陰性對(duì)照孔OD值平均值≤0.15。
臨界值計(jì)算
臨界值（Cutoff）=陰性對(duì)照孔平均值+0.15。
結(jié)果判定
陰性：樣本OD值<臨界值。
陽(yáng)性：樣本OD值>臨界值。
四、注意事項(xiàng)
操作規(guī)范
實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋密封保存。
所有液體組分使用前需充分搖勻，避免產(chǎn)生氣泡。
安全防護(hù)
避免直接接觸終止液和底物A、B，若接觸需立即用水沖洗。
實(shí)驗(yàn)中禁止吃喝、抽煙或使用化妝品。
儀器與設(shè)備
需配備450nm酶標(biāo)儀、高精度加樣器及槍頭、37℃恒溫箱。
試劑保存
試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)。
試劑盒需2-8℃避光防潮保存，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作。
五、試劑盒優(yōu)勢(shì)
高敏感性與特異性：歐盟CE認(rèn)證，不與其他可溶性結(jié)構(gòu)類(lèi)似物交叉反應(yīng)。
操作簡(jiǎn)便：即用型試劑，適用于手動(dòng)或自動(dòng)化檢測(cè)系統(tǒng)。
臨界值質(zhì)控：提供質(zhì)控品，確保檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。
六、應(yīng)用領(lǐng)域
疾控中心、科研實(shí)驗(yàn)室、醫(yī)院等機(jī)構(gòu)用于白喉棒狀桿菌毒素抗體的檢測(cè)，輔助白喉疾病的診斷與流行病學(xué)調(diào)查。
通過(guò)上述方法，可高效、準(zhǔn)確地檢測(cè)樣本中白喉棒狀桿菌毒素抗體的存在，為白喉的防控提供科學(xué)依據(jù)
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