大腸菌群（大腸桿菌）檢測實驗培養(yǎng)基（LST肉湯）滅菌時，偶爾會有小氣泡留在小導(dǎo)管內(nèi)，導(dǎo)致培養(yǎng)基不能使用。重復(fù)滅菌不僅費時費電，還會破壞培養(yǎng)基的成分。為了避免問題的發(fā)生，根據(jù)實驗經(jīng)驗和嚴(yán)密思考做出幾種原因分析，并給予解決的辦法。

原因一：過早打開滅菌鍋

當(dāng)滅菌鍋壓力表示數(shù)為0而溫度表示數(shù)還高與室溫時，不要打開滅菌鍋。因為打開鍋蓋瞬間，鍋內(nèi)大量熱量散出，溫度突然降低，試管內(nèi)溫度也隨著降低，導(dǎo)致管內(nèi)氣減小，沸點降低，部分水會汽化留在小導(dǎo)管內(nèi)。

解決辦法：等滅菌鍋內(nèi)氣壓和溫度都降到與室溫一致或相差不大時再打開滅菌鍋。

原因二：試管塞塞得太緊（使用硅膠塞的時候）

試管塞塞得太緊在滅菌時會導(dǎo)致試管內(nèi)與滅菌鍋內(nèi)壓力不一致。在滅菌鍋升溫升壓時，鍋內(nèi)壓力會大于管內(nèi)壓力；滅菌鍋降溫降壓時，鍋內(nèi)壓力小于管內(nèi)壓力。鍋內(nèi)壓力會大于管內(nèi)壓力時，試管內(nèi)壓力不夠，不能將小導(dǎo)管內(nèi)氣體排盡，就留有氣泡；鍋內(nèi)壓力小于管內(nèi)壓力時，可能會使試管塞和培養(yǎng)基崩出，培養(yǎng)基報廢。

解決辦法：改用透氣性好的棉花塞，切勿使用橡皮塞。

原因三：小導(dǎo)管口太小

我們可以把一根毛細(xì)管一端封口，另一端插進(jìn)水里，毛細(xì)管里怎么都不會進(jìn)水。同樣把一個燒杯倒扣進(jìn)水里就很容易進(jìn)水了。小導(dǎo)管在加壓后一方面水要進(jìn)去，另外里面的空氣要出來，如果口太小的話，空氣不容易出去，水也不容易進(jìn)來，就會導(dǎo)致氣泡六在里面了。

解決辦法：改用內(nèi)空較大的導(dǎo)管，盡量使用V型管，不要使用錐型管。

原因四：培養(yǎng)基質(zhì)量引起

由培養(yǎng)基質(zhì)量引起的氣體不能排盡或培養(yǎng)基含有高溫高壓分解產(chǎn)氣的成分。滅菌時用水做培養(yǎng)基組的對照試驗，若培養(yǎng)基組有氣泡，而對照組沒有氣泡，可確定是有此原因引起。

解決辦法：改用其它培養(yǎng)基。

原因五：滅菌鍋工作壓力不夠，使氣體不能排盡

滅菌鍋壓力不夠不能使管內(nèi)液體強(qiáng)行把氣體擠出，最后還留有小氣泡，還會使溫度上升緩慢，或達(dá)不到滅菌溫度。此原因的可能性較小，我們可以在排除原因一、二、三、四的情況下，用不加試管塞、大口導(dǎo)管做試驗，若還仍不能達(dá)到效果，就要檢查滅菌鍋了。

解決辦法：修理滅菌鍋。

注意事項：①為主要原因。②不要將試管倒置，以免試管口和試管塞受培養(yǎng)基污染。

以上提供幾種可能形成氣泡的主要原因，還有幾點建議：

1、可以在高壓鍋壓力降下來后，溫度不太高的時候?qū)⑴囵B(yǎng)基從鍋中拿出，迅速放在冷水中，急冷，注意要使冷水高度超過試管中液面高度。利用熱脹冷縮的原理，可以使小倒管中氣泡排出。

2、若使用非全自動高溫高壓滅菌鍋（此類鍋一般需要在100℃手動關(guān)閉放氣閥），則不要在鍋剛達(dá)到100℃時就關(guān)閉放氣閥，可以讓高壓鍋在100℃時多排一會兒熱氣，這樣有助于小倒管中氣體排出。

此外，盡量不要采用將滅菌后的試管顛倒或大角度傾斜的方式，使小倒管內(nèi)氣體排出。此種方法可能會導(dǎo)致培養(yǎng)基通過試管口或試管塞受到污染，或者導(dǎo)致試管內(nèi)液體流出。

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