脂肪酸合成酶(FAS)測試盒的測定步驟涉及多個環(huán)節(jié),包括樣本準備、試劑準備、加樣與反應、洗滌、顯色與終止以及測定。在使用測試盒時,務必遵循使用說明和注意事項,以確保檢測結(jié)果的準確性和可靠性。
脂肪酸合成酶(FAS)測試盒的測定步驟:
-血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激。收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
-血漿:建議使用EDTA、檸檬酸鹽或肝素作為抗凝劑,3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。
-細胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
-組織樣本:如肝臟等組織,需先進行勻漿處理,然后通過離心等步驟提取上清液作為待測樣本。
-從冷藏環(huán)境中取出試劑盒,在開啟之前需要室溫平衡至少30分鐘,確保所有試劑在使用前達到適宜溫度。
-在相應孔中加入標準品或樣品,然后依次加入酶標試劑等反應試劑。具體加樣量和順序應嚴格按照說明書要求進行。
-輕輕晃動混勻,注意避免產(chǎn)生氣泡,以免影響反應結(jié)果。
-蓋上封板膜,在適宜的溫度下孵育一段時間,使抗原抗體充分結(jié)合。
-小心揭掉封板膜,棄去液體并甩干。
-每孔加滿洗滌液,靜置片刻后棄去,重復此過程多次,以充分洗凈反應孔中的未結(jié)合物質(zhì)。
-洗滌后,確保拍干板中的殘余液體。
-加入底物TMB等顯色劑,在適宜溫度下避光孵育一段時間,使反應產(chǎn)生顏色變化。
-當觀察到標準品孔出現(xiàn)明顯顏色梯度時,加入終止液終止反應。
-使用酶標儀在規(guī)定波長下測定吸光度(OD值),通常為450nm波長。
-根據(jù)標準品的OD值繪制標準曲線,再根據(jù)樣品的OD值計算其濃度或活性。

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