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小鼠D二聚體(D2D)定量檢測(cè)試劑盒(ELISA)

來(lái)源:上海博耀生物科技有限公司   2012年10月23日 10:48  

 

僅供科研使用,不得用于醫(yī)學(xué)診斷。
使用前仔細(xì)閱讀本說(shuō)明書(shū)。
 
    用于定量檢測(cè)小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中D二聚體(D2D)的含量。
工作原理
本試劑盒采用雙位點(diǎn)夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA),測(cè)定樣品中小鼠D二聚體(D2D)的水平。向預(yù)先包被小鼠D二聚體(D2D)抗體的酶標(biāo)孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本和HRP標(biāo)記的D二聚體(D2D)抗體,經(jīng)過(guò)溫育和洗滌,去除未結(jié)合的組分,然后再加入底物A、B,產(chǎn)生藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺與樣品中小鼠D二聚體(D2D)的濃度呈正相關(guān)
試劑盒組成

1
標(biāo)準(zhǔn)品(2000ng/ml)
0.5ml
7
顯色劑A液
6ml
2
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
6mL
8
顯色劑B液
6ml
3
酶標(biāo)包被板
12孔×8條
9
終止液
6ml
4
酶標(biāo)試劑
6ml
10
說(shuō)明書(shū)
1份
5
20×濃縮洗滌液
25ml
11
封板膜
2張
6
樣品稀釋液
6ml
12
密封袋
1個(gè)

注:標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液依次稀釋為:2000、1000、500、250、125、0ng/ml
需要而未提供的試劑和器材
1. 37恒溫箱。
2. 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。
3. 精密移液器及一次性吸頭
4. 蒸餾水,
5. 一次性試管
6. 吸水紙
注意事項(xiàng)
1. 2-8取出的試劑盒,在開(kāi)啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差
3. 建議所有標(biāo)準(zhǔn)品、樣本都做雙份檢測(cè)。
4. 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
5. 為避免交叉污染,要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。
6. 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
7. 底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。
洗板方法
手工洗板方法:甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體;在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要,重復(fù)此過(guò)程數(shù)次。
自動(dòng)洗板:如果有自動(dòng)洗板機(jī),應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中
 
標(biāo)本要求
1不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
2標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
操作程序
1. 分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl;在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。輕輕晃動(dòng)混勻,37溫育60分鐘。
2. 棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)稀釋后洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。如此重復(fù)5次,拍干。
3. 每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37避光顯色15分鐘.
4. 取出酶標(biāo)板,每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
5. 測(cè)定:以空白孔調(diào)零,在450nm波長(zhǎng)下測(cè)量各孔的吸光度值(OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。
6. 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了的,其實(shí)際濃度應(yīng)該乘以總稀釋倍數(shù)。
操作程序總結(jié)
準(zhǔn)備試劑,樣品和標(biāo)準(zhǔn)品
 


 

加入準(zhǔn)備好的樣品、標(biāo)準(zhǔn)品和酶標(biāo)試劑,37反應(yīng)60分鐘
 
洗板5次,加入顯色液A、B,37顯色15分鐘
 
加入終止液
 
15分鐘之內(nèi)讀OD
 
計(jì)算
 
檢測(cè)范圍:62.5 ng/ml -2000ng/ml。
規(guī)格:    96T/
保存:    2-8
有效期: 6個(gè)月(2-8)。

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