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核被膜（nuclear envelope）是包被核內(nèi)含物的雙層膜結(jié)構(gòu)，作為界膜，它把細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)分開，有利于穩(wěn)定基因的結(jié)構(gòu)，外核膜與胞質(zhì)中的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相鄰，外表亦有核糖體附著，內(nèi)核膜附著有一層纖維狀蛋白網(wǎng)，該結(jié)構(gòu)對內(nèi)膜具有支撐作用。核間隙與粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔相通，內(nèi)含多種蛋白質(zhì)和酶，核膜還控制著細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)之間的物質(zhì)交換。
分離核膜幾乎都以肝臟為原料，但不同類型的研究用不同的制備方法，有些方法適合于膜組成的研究，有些方法適合于酶與通透性研究。基本上分為低離子強(qiáng)度和高離子強(qiáng)度法。高離子濃度法用高濃度的陽離子使膜破裂，該方法能獲得較高產(chǎn)量的膜。低離子濃度法可使膜具有形態(tài)完整并保留的酶活性高。Kaufmann等用高離子強(qiáng)度介質(zhì)快速從鼠肝細(xì)胞核中分離完整核膜，幾乎不受污染，對研究核基質(zhì)和核被膜間的關(guān)系非常有用。Fraser等用DNase處理染色體分離核被膜碎片，染色體污染少。
本文講述用高速冷凍離心機(jī)進(jìn)行核膜的亞分級分離的方法和步驟。
1. 把核被膜（大約1~2mg蛋白質(zhì)）懸浮在5ml冰冷的10mmol/L三乙醇胺-HCl、0.1mmol/L蔗糖（pH=7.5）中，再加入0.5ml 20%（體積分?jǐn)?shù)） Triton X-100，在0℃孵育10分鐘。
2. 該懸浮液，在45000gmax離心，使核被膜沉降。
3. 把沉淀重新懸浮在5mL相同的緩沖液里（不加去垢劑），再加入5ml 100mmol/L 三乙醇胺-HCl、2.0mol/L NaCl。
4. 在0℃孵育10分鐘后，懸浮液再發(fā)步驟2離心，沉淀是管孔復(fù)合體疊層膜。
在所有步驟中，勻漿重懸是基本步驟，在往沉淀里加2~3滴甘油搖動或手工勻漿。用1%（質(zhì)量濃度）檸檬酸（1ml/mg核蛋白）抽提細(xì)胞核來制備外核膜，通過低速離心上清液在120000gmax離心（6*14ml甩開轉(zhuǎn)子，26500r/min）、4℃離心1小時來沉淀膜。
湖南湘立研制生產(chǎn)的幾款醫(yī)用離心機(jī)可以用來進(jìn)行細(xì)胞分離，如DL5M/TDL5M兩種型號的低速冷凍離心機(jī)可用來進(jìn)行干細(xì)胞實(shí)驗。XL03RH型控溫離心機(jī)（低速冷凍離心機(jī)）可用來進(jìn)行溫度敏感型人體細(xì)胞分離。
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