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Bio-Rad推出基于QX100微滴式數(shù)字PCR平臺(tái)的Illumina TruSeq測(cè)序文庫ddPCR定量試劑盒
Bio-Rad推出基于QX100微滴式數(shù)字PCR平臺(tái)的Illumina TruSeq測(cè)序文庫ddPCR定量試劑盒
2013年Bio-Rad推出基于QX100TM微滴式數(shù)字PCRTM平臺(tái)的Illumina TruSeq測(cè)序文庫定量試劑盒，用于檢測(cè)測(cè)序文庫質(zhì)量和拷貝數(shù)，實(shí)現(xiàn)真正對(duì)測(cè)序文庫的全質(zhì)量控制。
二代測(cè)序（NGS）又叫高通量測(cè)序，是測(cè)序技術(shù)革命性的進(jìn)步，能一次上百萬條DNA分子進(jìn)行序列測(cè)定，使得對(duì)一個(gè)物種的轉(zhuǎn)錄組和全基因組進(jìn)行細(xì)致全貌的分析成為現(xiàn)實(shí)。如今NGS在生物學(xué)研究中的應(yīng)用變得越來越廣泛，目前主流的NGS儀器平臺(tái)為Illumina、Life Technologies 和 Roche 454。
對(duì)于Illumina 的MiSeq和HiSeq高通量測(cè)序平臺(tái)而言，測(cè)序文庫的定量分析和質(zhì)量評(píng)價(jià)對(duì)于獲得高質(zhì)量的核酸測(cè)序數(shù)據(jù)十分關(guān)鍵。因?yàn)椋?/span>
1.如果測(cè)序文庫拷貝數(shù)偏低，將不能獲得足夠的測(cè)序數(shù)據(jù)，導(dǎo)致降低數(shù)據(jù)產(chǎn)出；
2.如果測(cè)序文庫拷貝數(shù)過高，將產(chǎn)生低質(zhì)量的測(cè)序數(shù)據(jù)，甚至?xí)?dǎo)致測(cè)序失敗。
2.如果測(cè)序文庫拷貝數(shù)過高，將產(chǎn)生低質(zhì)量的測(cè)序數(shù)據(jù)，甚至?xí)?dǎo)致測(cè)序失敗。
因此，要控制NGS測(cè)序儀上測(cè)序文庫的載入量，保證測(cè)序數(shù)據(jù)的質(zhì)量，就需要在測(cè)序前對(duì)DNA測(cè)序文庫進(jìn)行定量分析。此外，為減少NGS運(yùn)行成本，用戶往往需要將不同測(cè)序文庫等摩爾量合并為一份測(cè)序樣品同時(shí)測(cè)序，這也以測(cè)序文庫的準(zhǔn)確定量分析為前提，如此才能保證不同文庫的測(cè)序數(shù)據(jù)的可靠性。
以往的llumina TruSeq平臺(tái)的測(cè)序文庫定量方法費(fèi)時(shí)費(fèi)工，且只能提供文庫的濃度信息。例如：
qPCR-NGS文庫定量法：僅能檢測(cè)可擴(kuò)增文庫，依賴標(biāo)準(zhǔn)曲線評(píng)估文庫拷貝數(shù)，不能*顯示測(cè)序文庫片段長度的差異，容易受引物二聚體或者背景污染影響，受制于擴(kuò)增效率從而造成定量結(jié)果偏差。
微流體毛細(xì)管電泳法：依賴核酸嵌入式染料發(fā)出的熒光信號(hào)，對(duì)于連接錯(cuò)誤、單鏈和/或未擴(kuò)增片段的定量分析準(zhǔn)確性低。
分光光度計(jì)法：利用分光光度法，通過測(cè)定文庫對(duì)特定波長的光的吸收度，對(duì)文庫進(jìn)行定量分析，準(zhǔn)確性差，無法反應(yīng)測(cè)序文庫質(zhì)量。
Bio-Rad QX100TM ddPCRTM測(cè)序文庫定量試劑盒，可簡單快捷地實(shí)現(xiàn)對(duì)Illumina TruSeq測(cè)序文庫的質(zhì)量控制；無縫整合進(jìn)Illumina TruSeq 測(cè)序工作流程，同時(shí)提供對(duì)測(cè)序文庫的定量分析（拷貝/微升，還可轉(zhuǎn)成摩爾濃度）和質(zhì)量評(píng)估信息（接頭二聚體和測(cè)序片段長度等反映測(cè)序文庫質(zhì)量的信息）：
可對(duì)測(cè)序文庫進(jìn)行定量，無需標(biāo)準(zhǔn)曲線；還可對(duì)測(cè)序文庫質(zhì)量進(jìn)行評(píng)估，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)測(cè)序文庫的質(zhì)控以提高NGS測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)量
相比qPCR更準(zhǔn)確的測(cè)序文庫質(zhì)量評(píng)估
測(cè)序文庫裝定量分析結(jié)果可靠性高、重復(fù)性好
有助于多樣本合并測(cè)序時(shí)各樣本測(cè)序文庫含量的配平
能無縫整合進(jìn)Illumina TruSeq 工作流程
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