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免疫組化切片染色ABC Kit

來源:北京博蕾德國際貿(mào)易有限公司   2014年07月29日 15:39  

簡介

Santa 公司免疫組化染色ABC kit 適用于兔、山羊、小鼠、大鼠來源的一抗冰凍切片或石蠟切片顯色,一個盒子足夠染200張切片。

產(chǎn)品信息:

產(chǎn)品名稱

貨號

適用檢測

ImmunoCruzTM goat ABC Staining System

sc-2023

山羊來源的一抗

ImmunoCruzTM Rabbit ABC Staining System

sc-2018

兔來源的一抗

ImmunoCruzTM mouse ABC Staining System

sc-2017

小鼠來源的一抗

ImmunoCruzTM rat ABC Staining System

sc-2019

大鼠來源的一抗

試劑盒組成(ImmunoCruzTM mouse ABC Staining System 為例)

  1. 1ml正常封閉血清
  2. 250ug 生物素標記的二抗
  3. 0.5ml親和素標記HRPAB試劑)
  4. 1ml 50X過氧化物酶底物
  5. 1ml 50X DAB顯色液
  6. 3ml 10 X底物緩沖液
  7. 用于工作液制備的小瓶

客戶需自備的試劑:

  1. PBS緩沖液
  2. 0.1-1%雙氧水,溶于PBS、雙蒸水或甲醇
  3. 一抗
  4. 樣品固定試劑
  5. 復(fù)染試劑(可選的)
  6. 封片劑

操作流程:

所有步驟均在室溫操作,用足夠的試劑浸潤切片,一般100ul足夠或1-3滴工作液,避免在操作過程中樣本變干。

  1. 可選步驟)切片制備好以后,切片需用0.1-1%的過氧化氫(溶于PBS,去離子水或甲醇)孵育5-10min,以去除內(nèi)源性過氧化物酶活性。用PBS沖洗兩次,5min/
  2. 可選步驟)切片用1.5%封閉血清(溶于PBS)孵育1h,如果沒有出現(xiàn)非特異性染色,該步驟可省略。
  3. 切片用一抗室溫孵育30min4孵育12h。通過滴定法確定*的一抗稀釋度,推薦范圍:0.5-5ug/ml,用1.5%封閉血清(溶于PBS)。PBS洗滌3次,5min/
  4. 用生物素標記的二抗孵育切片30min,二抗?jié)舛燃s1ug/ml,PBS洗滌3次,5min/
  5. AB酶試劑,孵育切片30min, PBS洗滌3次,5min/
  6. 用過氧化物酶底物溶液1-3滴孵育切片30s-10min或直至強顯色出現(xiàn)。如果需要的話,加入更多的過氧化物酶底物溶液,繼續(xù)孵育,用去離子水洗滌5min。
  7. (可選步驟) 蘇木精復(fù)染5-10s,用去離子水洗滌數(shù)次。
  8. (可選步驟)用酸乙醇脫色,染成藍色,水沖洗。
  9. 對于石蠟包埋組織,用以下方法脫水:a.2 x 95%10s,2x100%乙醇10s,3x二甲苯10s。去除多余的二甲苯
  10. 立即加入1-2滴封片劑,蓋上蓋玻片,顯微鏡觀察。

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