黃蜀葵花為錦葵科植物黃蜀葵（Abelmoschus manihot (L. ) Medic）的干燥花冠，具有通淋、消腫、解毒等功效，多用來(lái)治療淋病、癰疽腫毒、燙傷等。有研究指出黃蜀葵花的主要成分為黃酮類化合物，其中以金絲桃苷、槲皮素，異槲皮素含量zui高。本文利用天津蘭博*代理的美國(guó)蘭博液相色譜儀建立了測(cè)定黃蜀葵花中金絲桃苷的含量的HPLC法，結(jié)果表明方法簡(jiǎn)單準(zhǔn)確，結(jié)果可靠。

1.1 儀器

分析型液相色譜儀（HPLC），由AS3000自動(dòng)進(jìn)樣器，Laballiance Series 高壓泵、DAD檢測(cè)器和Lablliance色譜工作站組成，配一支C18 Kromasil 色譜柱( 4. 6 mm × 250 mm, 5 um)；AXM-8 Temp.柱溫箱。

1.2試劑和樣品

金絲桃苷對(duì)照品品（中國(guó)藥品生物制品檢定所），乙腈（色譜純），水為屈臣氏蒸餾水，其他試劑為分析純，黃蜀葵花樣品購(gòu)自當(dāng)?shù)厮幍?，產(chǎn)地為安徽。

1.3對(duì)照品溶液配制

精密稱取金絲桃苷對(duì)照品5.00 mg，加甲醇定容至25 mL，制成0.200 g/L的金絲桃苷對(duì)照品儲(chǔ)備液，冷藏備用。

1.4供試品溶液的制備

精密稱取樣品粉末200 mg，70%甲醇溶解，超聲30 min，過(guò)濾液置于50mL容量瓶中，加70%甲醇定容至刻度，冷藏備用。

1.5色譜條件：

色譜柱：Kromasil (4. 6 mm × 250 mm, 5 um)；

流動(dòng)相：乙腈-0.5%磷酸水溶液（v/v=20:80）

柱溫：40℃；

流速：1.0 mL/min；

檢測(cè)波長(zhǎng)：360 nm；

進(jìn)樣量：20 uL。

2測(cè)試結(jié)果

2.1檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

取金絲桃苷對(duì)照品溶液和樣品溶液，分別進(jìn)行紫外光譜掃描，金絲桃苷在258nm和360nm有兩個(gè)zui大吸收峰，兼顧樣品和對(duì)照品，所以我們選用測(cè)定波長(zhǎng)為360nm。

圖1 金絲桃苷對(duì)照品的液相色譜圖

2.2線性關(guān)系、方法檢出限考察

分別移取金絲桃苷對(duì)照品儲(chǔ)備液0.5、1、2、3、4 mL，分別用甲醇定容至10 mL，配制得到一系列對(duì)照品溶液。取上述溶液各20 uL，按1.5所述色譜條件進(jìn)樣分析。以峰面積Y為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量X（ug）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性方程。金絲桃苷的線性回歸方程為Y = 209253 X +9531.5，r = 0.9998，線性范圍為2～16 ug；以3倍信噪比計(jì)算該方法的zui低檢測(cè)限為30 ng.

2.3精密度和重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)

取供試品溶液重復(fù)進(jìn)樣6次，每次20 uL，測(cè)定峰面積。金絲桃苷峰面積測(cè)定結(jié)果的RSD為1.34%，表明方法精密度良好 。

取樣品，按1.4條件制備6份供試品溶液，分別進(jìn)樣20 uL，測(cè)定峰面積，計(jì)算金絲桃苷的含量，含量測(cè)定結(jié)果的 RSD為1.03%，表明方法重現(xiàn)性良好。

2.4穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取樣品溶液分別在0、2、4、8、12按1.5的色譜條件進(jìn)樣，（不測(cè)時(shí)于冰箱4℃冷藏），測(cè)定峰面積，峰面積的RSD分別為1.86%，結(jié)果表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)

精密稱取已知金絲桃苷含量的黃蜀葵花樣品，分別加入不同含量的金絲桃苷對(duì)照品，按1.4項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測(cè)定含量，計(jì)算回收率，結(jié)果如表1。

表1 加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果

3結(jié)論

黃蜀葵花的主要化學(xué)成分是黃酮類，其中金絲桃苷，含量較高，活性較強(qiáng)，且性質(zhì)穩(wěn)定，所以選擇測(cè)定金絲桃苷的含量做為質(zhì)量控制的指標(biāo)。本文采用液相色譜法測(cè)定黃蜀葵花中金絲桃苷的含量，經(jīng)過(guò)精密度、回收率等試驗(yàn)考查，均符合要求。該方法靈敏，快速，準(zhǔn)確，可用于對(duì)黃蜀葵花的質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)。