*章 Western Blot 簡介

1.1  Western Blot 原理

    與 Southern 或 Northern 雜交方法類似，但 Western Blot 采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。經(jīng)過 PAGE 分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應的抗體起免疫反應，再與酶或同位素標記的第二抗體起反應，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應用于檢測蛋白水平的表達。

1.2  Western Blot 優(yōu)點

高分辨率的電泳技術(shù)

特異敏感的抗原-抗體反應

1-5 ng 中等大小的靶蛋白

Western Blot 結(jié)合了凝膠電泳的高分辨率和固相免疫測定的特異敏感等多種優(yōu)點，可檢測到低至 1～

5 ng（zui低可到 10～100 pg）中等大小的靶蛋白。

1.3  Western Blot 應用

目的蛋白的表達特性分析

目的蛋白與其它蛋白的互作

目的蛋白的組織定位

目的蛋白的表達量分析

1.4  Western Blot 成功要素