人滑膜原代細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)步驟一、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備
 
1.   滑膜組織：將外科手術(shù)切下的組織在手術(shù)臺(tái)上請護(hù)士將標(biāo)本放入低溫生理鹽水中，在手術(shù)完成時(shí)將標(biāo)本放入PBS冰水液中并放入消毒的容器中帶回實(shí)驗(yàn)室。
 
2.   試劑：4 mg/mlⅠ型膠原酶(α-MEM配制)，培養(yǎng)液(含10%胎牛血清的α-MEM)。
 
3.   器械：手術(shù)器械。
 
人滑膜原代細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)步驟二、方法
 
1.   將切下的組織在手術(shù)臺(tái)上請護(hù)士將標(biāo)本放入低溫生理鹽水中(靜止)，在手術(shù)完成時(shí)將標(biāo)本放入PBS冰水液中并放入消毒的容器中帶回實(shí)驗(yàn)室。
 
2.  在超凈臺(tái)中將標(biāo)本放入培養(yǎng)皿中，加入α-MEM洗滌。
 
3.  獲得組織切開，仔細(xì)辨認(rèn)于關(guān)節(jié)反折處及增生的白色光滑的滑膜組織，附于關(guān)節(jié)軟骨面的增生的血管翳也為滑膜組織(可作另一管消化)，仔細(xì)剔除脂肪組織，用α-MEM洗二次(以去除紅細(xì)胞)，放在小青瓶中用解剖剪銳性切碎。
 
4.   用雙倍獲得組織的體積含有4 mg/mlⅠ型膠原酶的α-MEM消化37℃孵育120分鐘(在此期間震動(dòng)混勻數(shù)次)。
 
5.   30分鐘后收集*管細(xì)胞：細(xì)胞懸液經(jīng)70 μm細(xì)胞濾網(wǎng)過濾，用1500-2000轉(zhuǎn)離心6分鐘，上清為Ⅰ型膠原酶加入未過濾網(wǎng)的組織，繼續(xù)用于消化。
 
6.   離心管底細(xì)胞用α-MEM離心洗滌2次，每次用α-MEM重懸浮后用1500-2000轉(zhuǎn)，離心6分鐘，zui后一次用記數(shù)板觀察到有細(xì)胞。細(xì)胞zui終懸浮于含有10%胎牛血清的α-MEM中，接種到培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
 
7.  60鐘后收集第二管細(xì)胞：細(xì)胞懸液經(jīng)70 μm細(xì)胞濾網(wǎng)過濾，用1500-2000 rpm離心6分鐘；用α-MEM洗2次，每次用α-MEM重懸浮后用1500-2000 rpm離心6分鐘，zui后一次用記數(shù)板觀察細(xì)胞并計(jì)數(shù)。細(xì)胞zui終懸浮于α-MEM含有10%胎牛血清中，接種到培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
 
8.   必要時(shí)可做第三管細(xì)胞收集；并立即作原代滑膜細(xì)胞培養(yǎng)。
 
9.  每2-3天換液一次。人滑膜原代細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)步驟