混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)步驟1.  刺激細(xì)胞的準(zhǔn)備
 
常用的刺激細(xì)胞有EB病毒轉(zhuǎn)化的B淋巴細(xì)胞（如N23細(xì)胞）或PBMC。
 
（1）取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的N23細(xì)胞，離心后重懸于新鮮*培養(yǎng)基中。
 
（2）調(diào)整細(xì)胞數(shù)為1×106 /ml~2×106 /ml，移置于塑料培養(yǎng)瓶或者50 ml 離心管中。
 
（3）用60 ℃照射3000 rad。
 
混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)步驟2.  反應(yīng)細(xì)胞的準(zhǔn)備
 
分離純化待檢個(gè)體的PBMC。
 
3.  LC
 
（1）按2×106PBMC與1×105經(jīng)3000 rad照射的N23細(xì)胞的比例，重懸于4 ml 10%FCSRPMI1640。
 
（2）放置于小培養(yǎng)瓶中進(jìn)行MLC，培養(yǎng)瓶保持直立，培養(yǎng)4 d 內(nèi)不要晃動(dòng)。
 
（3）第5 d 加入1 ml 新鮮培養(yǎng)基。
 
4.  如要測(cè)定3H-TdR摻入率，一般可在MLC的第5 d 進(jìn)行。
 
5.  如要檢測(cè)MLC中NK、LAK或特異性殺傷性T淋巴細(xì)胞（CTL），一般在7~10 d 左右收獲效應(yīng)細(xì)胞。
混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)步驟