回收DNA片段實(shí)驗(yàn)步驟，一、從瓊脂糖介質(zhì)中純化DNA片斷

1.  用低熔點(diǎn)或常規(guī)熔點(diǎn)瓊脂糖電泳對(duì)PCR擴(kuò)增片斷進(jìn)行分離，該電泳安常規(guī)方法進(jìn)行，緩沖液為TAE。

2.  在凝膠上，找到所需條帶，然后用潔凈并滅菌的小刀將其切下接近300微升瓊脂糖凝膠 （約300毫克）

3.  如果切下的瓊脂糖為高融點(diǎn)的則安下面A步驟進(jìn)行，如為低融點(diǎn)瓊脂，則安B步驟進(jìn)行。

A.  將300微升瓊脂塊放進(jìn)1.5毫升的微量離心管中，加入1毫升純化用樹脂，然后將其置于65℃水浴保溫5分鐘，或保溫至瓊脂*溶解。

B.   將300微升瓊脂塊放進(jìn)1.5毫升的微量離心管中，然后將其置于70℃水浴保溫至瓊脂*溶解，然后加入1毫升純化用樹脂到融化好的瓊脂中，將其混合20秒，但不要振動(dòng)。

4.  為每一個(gè)待回收片斷準(zhǔn)備好一個(gè)微量柱。 在每個(gè)柱的開口處，聯(lián)上一針筒，然后將這些柱與針筒的復(fù)合體與抽真空設(shè)備相連

5.  在柱-針筒復(fù)合體中加入樹脂/DNA混合物，打開真空裝置，將樹脂與DNA的混合物抽到微量柱中，斷開真空裝置與柱的連接。

6.  洗柱，加入2毫升80%的異丙醇，打開真空裝置，使這些洗柱液*流經(jīng)微量柱。

7.  繼續(xù)真空30秒以干燥樹脂，注意此干燥時(shí)間不能超過30秒。關(guān)閉真空，移去針筒。將微量柱轉(zhuǎn)移至一1.5毫升微量離心管中。10 000 g 離心2分鐘，以*除去殘存的異丙醇。

8.   將微量柱，再轉(zhuǎn)移至一新的1。5毫升微量離心管中，加入50微升水或TE緩沖液，靜置1分鐘（在頭30秒，DNA仍將吸附于柱上）， 10 000 g 離心20秒，以洗脫DNA片斷，所得純化后的DNA片斷可直接用于連接反應(yīng)或在-20℃保存。

回收DNA片段實(shí)驗(yàn)步驟，二、尿素丙烯酰胺變性膠中分離DNA片斷

1.  從變形膠上切下待回收片斷，將其放如一微量離心管中。

2.  加入100微升TE緩沖液，37℃保溫30分鐘以上。

3.  將上清液吸入一新管中，加入1毫升樹脂，振蕩20秒以混勻樹脂與清液。回收DNA片段實(shí)驗(yàn)步驟