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生物毒性測試儀DXY-3使用說明

來源:丹東海浩電子科技有限公司   2016年06月15日 14:30  

一、生物毒性測試儀DXY-3目標(biāo)與要求

二、生物毒性測試儀DXY-3通過實(shí)驗(yàn)要求了解發(fā)光菌的生物毒性測試方法的基本原理。并搞清DXY型生物毒性測試儀的基本結(jié)構(gòu)、原理,并能進(jìn)行正確的操作和使用。

二、生物毒性測試儀DXY-3原理

發(fā)光菌的生物毒性測試是20世紀(jì)70年代后期建立起來的生物測試方法。發(fā)光菌是一種海洋發(fā)光細(xì)菌,屬一類非致病的革蘭氏陰性兼性厭氧細(xì)菌,它們在適當(dāng)?shù)臈l件下經(jīng)培養(yǎng)后,能發(fā)出肉眼可見的藍(lán)綠色的光。其發(fā)光原理是由于活體細(xì)胞內(nèi)具有ATP、螢光素(FMN)和螢光酶等發(fā)光要素。這種發(fā)光過程是細(xì)菌體內(nèi)的一種新陳代謝過程,即氧化呼吸鏈上的光呼吸過程。當(dāng)細(xì)菌合成螢光酶、螢光素、長鏈脂肪醛時(shí),在氧的參與下,能發(fā)生生化反應(yīng),便產(chǎn)生光。光的峰值在490 nm左右。生化反應(yīng)如下:

 

當(dāng)發(fā)光菌接觸到環(huán)境中有毒污染物質(zhì)時(shí),可影響或干擾細(xì)菌的新陳代謝,從而使細(xì)菌的發(fā)光強(qiáng)度下降或熄滅。有毒物質(zhì)的種類越多、濃度越高,抑制發(fā)光的能力越強(qiáng)。這種發(fā)光強(qiáng)度的變化可用測光儀定量地測定出來。由于毒物濃度與菌體發(fā)光度呈線性負(fù)相關(guān),因而可根據(jù)發(fā)光度確定毒物急性生物毒性。由于發(fā)光菌的生物毒性測試方法快速、簡便、靈敏,所以在有毒物質(zhì)的篩選,環(huán)境污染生物學(xué)評價(jià)等方面有很大的實(shí)用價(jià)值。

三、生物毒性測試儀DXY-3實(shí)驗(yàn)條件

1.器材

DXY型生物毒性測試儀:配制2 mL、5 mL樣品測試管(具標(biāo)準(zhǔn)磨口塞)、微量注射器(1 uL)、注射器(l mL)、定量加液瓶(5 mL)、吸管(2 mL、10 mL、25 mL)、試劑瓶(10 mL)、量筒(100 mL、500 mL)。棕色容量瓶(50 mL、250 mL、1000 mL)、10 mL半微量滴定管(配磨口試劑瓶,全套儀器均為棕色)。恒溫震蕩器,隔水式培養(yǎng)箱,高壓滅菌鍋,比色管架。

2.試劑和材料

(1)3%NaCl溶液

稱取3 g NaCl于玻璃容器內(nèi),用量筒加100 mL蒸餾水。

(2)2%NaCl溶液

稱取2 g NaCl于玻璃容器內(nèi),用量筒加 100 mL蒸餾水,2~5℃冰箱內(nèi)保存。

(3)參比毒物HgCl2標(biāo)準(zhǔn)溶液

0.02,0.04,0.06,0.08,0.10,0.12,0.14,0.16,0.18,0.20,0.22,0.24(mg/L)

(4)HgCl2母液,ρ=2000 mg/L

用電子天平稱密封保存良好的無結(jié)晶水HgCl2 0.100 g于50 mL容量瓶,用3% NaCl溶液稀釋至刻度,置 2~5℃冰箱備用,保存期6個(gè)月。

(5)HgCl2工作液,ρ=2 mg/L

用移液管吸 HgCl2母液10 mL于1000 mL容量瓶,用3%NaCl溶液定容。再用移液管吸HgCl2 20 mg/L液25 mL入250 mL容量瓶,用3%NaCl溶液定容,將此液倒入配有半微量滴定管的試劑瓶,然后,用3%NaCl溶液將 HgCl2 2 mg/L溶液按下表稀釋成系列濃度(一律采用50 mL容量瓶)。這些 HgCl2稀釋液保存期不超過24 h,超過者務(wù)必重配。

實(shí)驗(yàn)表13-1  HgCl2工作液稀釋配置系列(在50 mL容量瓶中)

加2 mg/L HgCl2(mL)

0.5

1.0

1.5

2.0

2.5

3.0

3.5

4.0

4.5

5.0

5.5

6.0

稀釋定容后HgCl2(mg/L)

0.02

0.04

0.06

0.08

0.10

0.12

0.14

0.16

0.18

0.20

0.22

0.24

 

(6)明亮發(fā)光桿菌T3小種(Photobacterium phosphoreum T3 spp.)凍干粉

安瓿瓶包裝,每瓶0.5 g,在2~5℃冰箱內(nèi)有效保存期為6個(gè)月。

四、實(shí)驗(yàn)步驟與方法

1.儀器的預(yù)熱和調(diào)零

打開生物發(fā)光光度計(jì)電源,預(yù)熱15 min,調(diào)零,備用。

2.試管的排列

在塑料或鐵制試管架上按以下二種情況排列測試管:

(1)當(dāng)樣品母液相對發(fā)光度為1%以上者,欲以與相對發(fā)光度相當(dāng)?shù)臐舛缺磉_(dá)結(jié)果者,如下排列:

左側(cè)放參比毒物HgCl2。系列濃度溶液管,右側(cè)放樣品管。前排放HgCl2溶液和樣品管,后一排放對照(CK)管,后二排放CK預(yù)試驗(yàn)管。每管HgCl2樣品液均配一管CK(3%NaCl溶液),設(shè)3次重復(fù)。每測一批樣品,常需同時(shí)配置測定系列濃度HgCl2標(biāo)準(zhǔn)溶液。

實(shí)驗(yàn)表13-2  測試管在試管架上的排列

后二排

CK預(yù)試1

CK預(yù)試2

后一排

CK

CK

CK

CK

CK

CK…

CK

CK

CK

CK

CK

CK

CK…

CK

前  排

0.02

0.02

0.02

0.04

0.04

0.04…

0.24

樣品1

樣品1

樣品1

樣品2

樣品2

樣品2…

樣品n

管  群

HgCl2(mg/L)

樣   品

 

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