用分光光度計對被測物質(zhì)進行測量時，儀器得到的直接結(jié)果是被測物質(zhì)對選定波長入射光的透射比。透射比是由每一被測物質(zhì)光譜特性決定的。 因此，它與波長檢定點的選擇、單射儀狹縫寬度及零點的調(diào)節(jié)、透射比準確度及光譜帶寬影響有著直接，通常表現(xiàn)為以下幾種：

　　一、波長

　　波長對測量結(jié)果的影響程度與波長測定點在被測物品光譜曲線的位置及儀器波長誤差的大小有關(guān)。當波長測量點位于被測樣品尖銳的吸收峰上或于較陡的斜坡上時，波長的較小偏移將會引起光度測量值的較大變動。 為此要得到相同的光譜強度，狹縫寬度要隨波長而改變。 如果狹縫是可變的或在移動和使用過程中，相對位置發(fā)生位移，狹縫引入誤差直接影響單色儀的波長準確度分辨力。在單色儀入射狹縫和出射狹縫寬度為零的條件下分辨力zui大， 當狹縫寬度增大時存在一些像差，分辨力則下降，從而影響測量的準確度。

　　儀器波長的固有誤差對分光光度計測量準確度也有一定的影響，它是儀器單位色系統(tǒng)與波長裝置在制造中的缺陷。 如儀器單位色系統(tǒng)色散元件、波長裝置中的刻線，傳動機構(gòu)在制造過程中不可避免存在著一定的加工誤差，就形成了該儀器固有的誤差。 這種誤差無法通過簡單的裝調(diào)來消除。

　　二、雜散輻射

用分光光度計對被測物質(zhì)進行測量時，出射狹縫處存在雜散光能量，這些能量來自于儀器內(nèi)各元件的表面反射以及元件中的雜質(zhì)和缺陷產(chǎn)生的漫射。 其表現(xiàn)為：在選定波長處所接收的輻射中，夾雜有不屬于入射輻射光束通帶內(nèi)的輻射的光線，這種輻射光線未通過樣品而直達光電探測器上。 因此，雜散光輻射是引起分光光度分析法測量結(jié)果出現(xiàn)誤差的一項主要來源。

　　三、光譜帶寬

　　用分光光度計對被測物質(zhì)進行測量時，入射狹縫相當于一個輻射源，因而，入射狹縫的寬度和高度決定了入射光束的形狀和通量。 在實際使用中，總是使入射狹縫寬度與出射狹縫寬度相同， 當縫的寬度發(fā)生變化時，出現(xiàn)在出射狹縫上的能量與縫寬變化平方成正比。狹縫越寬，則截取的波段越寬，因而出射狹縫的寬度決定了待測物品輻射的光譜帶寬，對于縫寬固定的儀器其影響較小，而對于狹縫可變的儀器則影響較大。例如：像干涉濾光片那樣的樣品，用帶寬較大的儀器測量帶寬較小的樣品，其峰值透射比要低，這樣將會給測量帶來一定的誤差。

　　四、透射比

　　透射比是分光光度計的一項綜合技術(shù)指標，不僅與儀器光源的穩(wěn)定性、單色器性能、單色光的準直度有關(guān)，探測系統(tǒng)變動性、照明光源的方向、測量的幾何條件、材料的表面狀態(tài)、光源輻射功率的分布、環(huán)境條件及入射光的偏振狀態(tài)等也都會引起透射比的隨機變化，特別是當待檢物品測量時的測量條件與傳遞標準測量時的測量條件有差異時會引入較大的不確定度。 例如，當入射光投射到某光滑介質(zhì)表面時，入射輻射能將其分解成垂直入射面和平行入射面，即波長的光行進方向與原光線的方向偏折了一個角度， 輻射能由空氣進入折射介質(zhì)時，透射比兩個分量隨入射角變化曲線而變化。 測量實踐證明：照明物品的光束與樣品法線夾角超過10°，光軸與照明光速的任一光線之間的夾角超過5°，透射光速直接進入探測器造成測量誤差，偏向角越大，波長越短，折射率越大。

　　五、溶液酸度

　　溶液酸度對分光光度計的測量也有一定的影響。在不同的溶液酸度的條件下， 反應(yīng)的*程度也不一致，顯示出不同的顏色。由此可知，當溶液酸度過大時，顯色劑離子的濃度減小，阻礙有色絡(luò)合物的形成。另一方面，當溶液酸度太小時，顯色劑離子的濃度增大，會產(chǎn)生氫氧化物沉淀。所以，適當選擇和控制好溶液酸度是非常有必要的，否則，會影響到分光光度計測量的靈敏度和重復(fù)性，造成一定的測量誤差。