資料簡(jiǎn)介
以下是關(guān)于大鼠Toll樣受體4(TLR4)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明綜合指南:
BS-3097 大鼠Toll樣受體4(TLR4)ELISA試劑盒
一、實(shí)驗(yàn)原理
采用雙抗體夾心法檢測(cè)TLR4水平:用純化的大鼠TLR4抗體包被微孔板,依次加入樣本、HRP標(biāo)記抗體形成復(fù)合物,TMB顯色后通過(guò)450nm波長(zhǎng)測(cè)定OD值,顏色深度與TLR4濃度呈正相關(guān)。
二、試劑盒組成
核心組件?
預(yù)包被96孔酶標(biāo)板
凍干標(biāo)準(zhǔn)品(通常含2瓶,使用前需用稀釋液重構(gòu))
生物素化抗體、HRP標(biāo)記親和素
TMB顯色液及終止液
輔助溶液?
樣品稀釋液(20ml)
濃縮洗滌液(需20-30倍稀釋)
三、樣本處理
血清/血漿?:采集后靜置10-20分鐘,2000-3000rpm離心20分鐘取上清。
組織勻漿?:用預(yù)冷PBS勻漿后離心取上清。
保存?:2-8℃短期保存,-20℃長(zhǎng)期保存,避免反復(fù)凍融。
四、操作步驟
標(biāo)準(zhǔn)品配制?
凍干標(biāo)準(zhǔn)品用稀釋液重構(gòu)后,梯度稀釋為40ng/ml至0.625ng/ml系列濃度。
檢測(cè)流程?
加樣:每孔加入100μl樣本或標(biāo)準(zhǔn)品,37℃孵育1-2小時(shí)。
洗滌:甩干孔內(nèi)液體,用洗滌液洗板3-5次。
顯色:加入TMB避光反應(yīng)15-30分鐘,終止后30分鐘內(nèi)讀板。
五、注意事項(xiàng)
質(zhì)量控制?:每次實(shí)驗(yàn)需包含空白孔和標(biāo)準(zhǔn)曲線孔。
干擾排除?:高濃度樣本需稀釋后復(fù)測(cè),避免異嗜抗體干擾。
有效期?:未開(kāi)封試劑盒2-8℃保存6個(gè)月,開(kāi)封后按說(shuō)明書(shū)要求使用。
六、適用范圍
僅限科研使用,檢測(cè)范圍通常為0.625-40ng/ml,靈敏度約0.156ng/ml。
(注:具體操作請(qǐng)以實(shí)際試劑盒說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn),不同品牌可能存在細(xì)微差異。)
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