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SGM輻照滅菌芽孢條產(chǎn)品說明2013/03/19: SGMStrip®輻照滅菌芽孢條引言SGMStrip是一種用于監(jiān)測輻射滅菌周期功效的生物指示劑，SGMStrip含短小芽孢桿菌ATCC271421的孢子。儲(chǔ)存SGMStrip應(yīng)在室溫下保存。芽孢條不應(yīng)放置在消毒劑或其他化學(xué)品附近，保質(zhì)期為24個(gè)月。防止脫水。培養(yǎng)胰蛋白胨大豆肉湯可以作為孢子的營養(yǎng)培養(yǎng)基。使用1.通過標(biāo)注相關(guān)步驟以及荷載點(diǎn)位置對(duì)孢子條做標(biāo)識(shí)。將孢子條放入滅菌產(chǎn)品內(nèi)部或產(chǎn)品包裝內(nèi)，并放置在zui難滅菌的點(diǎn)。請(qǐng)參考滅菌器制造商的操作指引手冊(cè)。2.在需要消毒的空間放置足夠數(shù)量的孢子條。注

Microbiologics公司推薦的各菌種的生長條件2013/03/09: 推薦生長條件（適用于KWKK-STIK和LYFODISK產(chǎn)品）如何選擇的菌種生長條件1.zui初的生長是在非選擇性瓊脂培養(yǎng)基上。除非特殊情況或特別推薦，zui初的生長一般不考慮液體培養(yǎng)基。這是由于在液體培養(yǎng)基中獲得凍干菌株的純種比較困難，污染所帶來的雜菌可能會(huì)過度生長，影響得到目標(biāo)菌株的純種。2.以下列出可供選擇的瓊脂培養(yǎng)基和相應(yīng)的生長條件，供各實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)菌種時(shí)參考。方法1ü胰蛋白胨大豆瓊脂，非選擇性羊血瓊脂，標(biāo)準(zhǔn)計(jì)數(shù)平板，或營養(yǎng)瓊脂-----35℃，正常環(huán)境，24-48小時(shí)。方法2ü非選擇性羊

PH7.2磷酸鹽緩沖液配制方法2013/03/09: Microbiologics公司的部分菌株產(chǎn)品有自帶的稀釋液，有些就需要自制的PH7.2磷酸鹽緩沖液，實(shí)驗(yàn)室也有很多地方會(huì)用到該緩沖液，其配制方法如下：StockSolution—Dissolve34gofmonobasicpotassiumphosphateinabout500mLofwatercontainedina1000-mLvolumetricflask.AdjusttopH7.2±0.1bytheadditionofsodiumhydroxideTS（about175mL）,addw

常見細(xì)菌中英文名對(duì)照表2013/03/09: Abiotrophiaadjacens毗鄰貧養(yǎng)菌Abiotrophiadefectiva軟弱貧養(yǎng)菌Achromobacterspp無色桿菌屬某些種Acinetobacter/Pseudomonasspp不動(dòng)桿菌/假單胞菌屬某些種Acinetobacterbaumannii鮑氏不動(dòng)桿菌Acinetobactercalcoaceticus醋酸鈣不動(dòng)桿菌Acinetobacterhaemolyticus溶血不動(dòng)桿菌Acinetobacterjohnsonii約氏不動(dòng)桿菌Acinetobacterjun

枯草芽孢桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備實(shí)驗(yàn)2013/03/02: 標(biāo)簽：枯草芽孢桿菌感受態(tài)細(xì)胞制備枯草芽孢桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備可以：（1）用于建立枯草芽孢桿菌轉(zhuǎn)化體系；（2）用于其基因改造；（3）用于提高枯草芽孢桿菌生產(chǎn)性能相關(guān)研究。實(shí)驗(yàn)方法化學(xué)法化學(xué)改進(jìn)法實(shí)驗(yàn)材料枯草芽孢桿菌168試劑、試劑盒SPI培養(yǎng)基EGTASPII培養(yǎng)基檸檬酸鈉EGTA氫氧化鈉KH2PO4K2HPO4MgCl2MgSO4葡萄糖酵母膏（NH4）2SO4儀器、耗材培養(yǎng)箱培養(yǎng)皿錐形瓶紫外分光光度計(jì)接種環(huán)離心管實(shí)驗(yàn)步驟一、試劑配制1.SP鹽0.2%（NH4）2SO4，1.4%K2HPO4，0.

酵母感受態(tài)細(xì)胞制備實(shí)驗(yàn)2013/03/02: 標(biāo)簽：酵母感受態(tài)細(xì)胞制備酵母感受態(tài)細(xì)胞制備可以：（1）用于建立酵母轉(zhuǎn)化體系；（2）用于酵母表達(dá)系統(tǒng)構(gòu)建；（3）用于酵母其他分子生物學(xué)研究。實(shí)驗(yàn)方法化學(xué)法試劑盒制備法實(shí)驗(yàn)材料釀酒酵母試劑、試劑盒YPDA液體培養(yǎng)基蒸餾水甘油二甲基亞砜儀器、耗材培養(yǎng)皿離心機(jī)離心管冰箱實(shí)驗(yàn)步驟一、試劑與耗材1.試劑細(xì)菌用-酵母提取物（Fisher）、細(xì)菌用-蛋白胨（Fisher）、葡萄糖（Fisher）、細(xì)菌用-瓊脂粉、去離子水、甘油（Sigma）、二甲基亞砜（Sigma）、聚乙二醇3350（Sigma）、醋酸鋰（Si

農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞制備實(shí)驗(yàn)2013/03/02: 氯化鈣法電轉(zhuǎn)農(nóng)桿菌感受態(tài)實(shí)驗(yàn)方法原理在基因工程操作中，感受態(tài)細(xì)胞的制備和質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化是一項(xiàng)基本技術(shù)。感受態(tài)是細(xì)菌細(xì)胞具有的能夠接受外源DNA的一種特殊生理狀態(tài)。農(nóng)桿菌的感受態(tài)可用CaCl2處理而誘導(dǎo)產(chǎn)生。將正在生長的農(nóng)桿菌細(xì)胞加入到低滲的CaCl2溶液中，0℃下處理便會(huì)使細(xì)菌細(xì)胞膜的透性發(fā)生改變，此時(shí)的細(xì)胞呈現(xiàn)出感受態(tài)。制備好的農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞迅速冷凍于-70℃可保存相當(dāng)一段時(shí)間而不會(huì)對(duì)其轉(zhuǎn)化效率有太大的影響。實(shí)驗(yàn)材料土壤農(nóng)桿菌LBA4404菌株試劑、試劑盒YEB液體培養(yǎng)基酵母提取物牛肉膏蛋白胨蔗

大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞制備、重組DNA的轉(zhuǎn)化、克隆篩選2013/03/02: 1.實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵笸ㄟ^本實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)氯化鈣法制備大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞和外源質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)入受體菌細(xì)胞的技術(shù)以及篩選轉(zhuǎn)化體的技術(shù)。了解細(xì)胞轉(zhuǎn)化的概念及其在分子生物學(xué)研究中的意義。2.相關(guān)知識(shí)及原理感受態(tài)細(xì)胞（Competentcells）：受體細(xì)胞經(jīng)過一些特殊方法（如：CaCl2，RuCl等化學(xué)試劑法）的處理后，細(xì)胞膜的通透性發(fā)生變化，成為能容許多有外源DNA的載體分子通過的感受態(tài)細(xì)胞（competentcell）。轉(zhuǎn)化（transformation）：是將異源DNA分子引入一細(xì)胞株系，使受體細(xì)胞獲得新的

細(xì)胞專題：細(xì)胞凍存和復(fù)蘇實(shí)驗(yàn)2012/12/17: 細(xì)胞凍存和復(fù)蘇實(shí)驗(yàn)標(biāo)簽：細(xì)胞凍存復(fù)蘇細(xì)胞凍存和復(fù)蘇可以：（1）用于生物學(xué)保種；（2）用于醫(yī)學(xué)上干細(xì)胞研究；（3）用于傳代培養(yǎng)。詳細(xì)實(shí)驗(yàn)方法細(xì)胞凍存和復(fù)蘇實(shí)驗(yàn)方法原理細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融，實(shí)驗(yàn)證明這樣可以zui大限度的保存細(xì)胞活力。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化，避免

蛋白專題：PAGE膠上蛋白質(zhì)的銀染方法2012/12/17: PAGE膠上蛋白質(zhì)的銀染方法有數(shù)百種，其原理相似，具體步驟各不相同。銀染為蛋白質(zhì)的非特異性染色，呈“爆炸性”反應(yīng)模式，用于蛋白定量時(shí)準(zhǔn)確性差，但其敏感度高、簡便易行，仍被廣泛應(yīng)用。下面列舉的這三種方法為常用的雙向電泳凝膠染色法，可與質(zhì)譜兼容。其中方法1敏感性zui高，方法3背景zui低、對(duì)比度好。1.Blamsilverstainingprotocol（Modified）程序溶液時(shí)間固定40%ETOH10%HAC1小時(shí)漂洗30%ETOH2×20min致敏0.02%Na2S2O31min漂洗H2O

PCR專題：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）2012/12/16: PCR技術(shù)可用于：（1）檢驗(yàn)感染性疾病是否處于隱性或亞臨床狀態(tài)；（2）有效檢測癌基因的突變，準(zhǔn)確檢測癌基因的表達(dá)量；（3）臨床應(yīng)用于檢測地中海貧血的基因突變。詳細(xì)實(shí)驗(yàn)方法PCR技術(shù)實(shí)驗(yàn)方法原理PCR技術(shù)的基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。PCR由變性--退火--延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：①模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至94℃左右一定時(shí)間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)做準(zhǔn)備；②

蛋白專題：蛋白質(zhì)免疫印跡（Western Blot ）2012/12/16: 蛋白質(zhì)免疫印跡（WesternBlot）可以：（1）從蛋白質(zhì)混合物中檢出目標(biāo)蛋白質(zhì)；（2）定量或定性確定細(xì)胞或組織中蛋白質(zhì)的表達(dá)情況；（3）用于蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)-DNA、蛋白質(zhì)-RNA相互作用后續(xù)分析。實(shí)驗(yàn)方法底物化學(xué)發(fā)光ECL法實(shí)驗(yàn)方法原理Western免疫印跡（WesternBlot）是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上，然后利用抗體進(jìn)行檢測的方法。對(duì)已知表達(dá)蛋白，可用相應(yīng)抗體作為一抗進(jìn)行檢測，對(duì)新基因的表達(dá)產(chǎn)物，可通過融合部分的抗體檢測。與Southern或Northern雜交方法類似，但Weste

HRM-遺傳變異分析的新技術(shù)2012/12/16: 高分辨率熔解（HRM）是一種基于雙鏈DNA在升溫時(shí)的解鏈行為的差異來區(qū)分不同的PCR產(chǎn)物的新技術(shù)。HRM技術(shù)的高分辨率使其得以區(qū)分即使是單個(gè)堿基的差異，因此該技術(shù)得以廣泛應(yīng)用于SNP分型、突變掃描、種屬鑒定和DNA甲基化分析，是目前經(jīng)濟(jì)和快速的基因分型和突變篩查方法之一。該有聲視頻攝錄于2010年維也納qPCR論壇。主講人：AndreasMissel,Ph.D.AssociateDirector,R&D,QIAGENAndreasMissel博士在QIAGEN負(fù)責(zé)修飾與擴(kuò)增技術(shù)與產(chǎn)品的開發(fā)，如用

大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備、重組DNA的轉(zhuǎn)化、克隆篩選2012/12/06: 1.實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵笸ㄟ^本實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)氯化鈣法制備大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞和外源質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)入受體菌細(xì)胞的技術(shù)以及篩選轉(zhuǎn)化體的技術(shù)。了解細(xì)胞轉(zhuǎn)化的概念及其在分子生物學(xué)研究中的意義。2.相關(guān)知識(shí)及原理感受態(tài)細(xì)胞（Competentcells）：受體細(xì)胞經(jīng)過一些特殊方法（如：CaCl2，RuCl等化學(xué)試劑法）的處理后，細(xì)胞膜的通透性發(fā)生變化，成為能容許多有外源DNA的載體分子通過的感受態(tài)細(xì)胞（competentcell）。轉(zhuǎn)化（transformation）：是將異源DNA分子引入一細(xì)胞株系，使受體細(xì)胞獲得新的

細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)步驟2012/12/05: 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)和掌握外源基因?qū)胝婧思?xì)胞的主要方法——脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染。了解外源基因進(jìn)入的一般性方法，觀測外源蛋白的表達(dá)（綠色熒光蛋白），為染色準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)材料。二、實(shí)驗(yàn)原理上圖所示是脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染的示意圖，它顯示了外源質(zhì)粒進(jìn)入細(xì)胞的一般過程。外源基因進(jìn)入細(xì)胞主要有四種方法：電擊法、磷酸鈣法和脂質(zhì)體介導(dǎo)法和病毒介導(dǎo)法。電擊法是在細(xì)胞上短時(shí)間暫時(shí)性的穿孔讓外源質(zhì)粒進(jìn)入；磷酸鈣法和脂質(zhì)體法是利用不同的載體物質(zhì)攜帶質(zhì)粒通過直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因進(jìn)入細(xì)胞；病毒法是利用包裝了外源基因的病毒感染

RNA提取過程經(jīng)驗(yàn)分享2012/12/05: 1.RNA提取的樣品很重要，包括樣品的質(zhì)量，細(xì)胞數(shù)，雜質(zhì)含量等等，建議：按照說明書的要求，每毫升TRIzol不超過100mg再低些在50mg左右;樣品的質(zhì)量一定要控制好；研磨得時(shí)間不宜過長，成粉狀即可，液氮常加（研磨的意義主要是使細(xì)胞與TRIzol的作用更充分，如有團(tuán)塊挑出取質(zhì)舍量）；作用時(shí)間15分鐘；2.氯仿抽提，一定要混勻，劇烈些沒關(guān)系。但一定要充分作用；3.異丙醇沉淀，混勻，冰上操作會(huì)在一定程度上增加RNA產(chǎn)量；4.75%乙醇清洗一次即可，速度我一般選擇高速8000g-10000g之間的，

一舉兩得！同時(shí)提取RNA和蛋白！2012/12/05: 具體的提取步驟如下:1.樣品加氯仿分層后,移去上層水相（該水相里就是RNA，可照常繼續(xù)進(jìn)行RNA的提?。?加0.3ml乙醇沉淀中間層和有機(jī)相中的DNA，渦旋混合，室溫放置3分鐘，2-8℃不超過2000×g離心5分鐘?！咀ⅲ哼@一步同時(shí)可以除去未*消化的殘?jiān)?.小心吸出沉淀后的上清，加1.5ml異丙醇沉淀蛋白質(zhì)。室溫放置10分鐘，2-8℃12000×g離心10分鐘棄上清。3.加2ml含0.3M鹽酸胍的95%乙醇洗滌蛋白質(zhì)沉淀。室溫放置20分鐘，2-8℃7500×g離心5分鐘，棄上清，重復(fù)兩次?！咀?

專題：找質(zhì)粒,載體圖譜及序列的方法2012/12/03: 找質(zhì)粒,載體圖譜及序列的方法1.Vectorpedia：輸入質(zhì)粒骨架，直接查詢，非常方便;http://www.addgene.org/pgvec1?f=v&cmd=listvecinfo2.google檢索式子：質(zhì)粒名＋map質(zhì)粒名＋sequence＋filetype:txtorfiletype:pdf或者：進(jìn)入google，點(diǎn)擊"圖片搜索"，直接查找圖譜.3.googlescholar:http://scholar.google.com/有些質(zhì)粒是經(jīng)過改造的，所以通過上述方法不能查詢到相應(yīng)信

原裝西班牙瓊脂糖Biowest aga技術(shù)參數(shù)2012/11/25: 瓊脂（Agar），又名瓊膠、菜燕、凍粉，是一類從石花菜及其它紅藻類（Rhodophyceae）植物提取出來的藻膠（phycocottoid），在我國及日本已有三百多年（1658年）的歷史。瓊脂糖Agarose，縮寫為AG，是瓊脂中不帶電荷的中性組成成份，也譯為瓊膠素或瓊膠糖。瓊膠糖化學(xué)結(jié)構(gòu)由β-D-吡喃半乳糖（1-4）連接3,6-脫水α-L-吡喃半乳糖基單位構(gòu)成.用途:瓊脂、瓊脂糖因?yàn)橛刑厥獾哪z凝性質(zhì)，尤其有顯著的穩(wěn)固性、滯度和滯后性，并且易吸收水分，有特殊的穩(wěn)定效應(yīng)；已經(jīng)廣泛使用于食用、醫(yī)藥、

英國OXOID 酵母粉LP0021技術(shù)參數(shù)2012/11/25: 英國Oxoid-LP0021酵母粉|YeastExtract-英國Oxoid-LP0021500g酵母粉|YeastExtract干酵母的自溶產(chǎn)物,富含氨基氮和維生素,優(yōu)其是水溶性維生素B復(fù)合物的含量豐富.它是許多培養(yǎng)基的組份之一,也常用于發(fā)酵肉湯以促進(jìn)細(xì)菌的生長.當(dāng)需要細(xì)菌快速,大量繁殖時(shí),也推薦使用.成份分析（每批平均）:（%W/W）總氮:10.9氨氮:5.3氯化鈉:0.3pH（2%溶液）:7.0英國Oxoid-LP0021酵母粉YeastExtract英國Oxoid-LP0021酵母粉Ye

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