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使用TSKgel UP-SW3000進(jìn)行單克隆抗體分析

TSKgel UP-SW3000單克隆抗體分析色譜柱 近年來(lái)，抗體藥物市場(chǎng)在逐步擴(kuò)大，未來(lái)的幾年仍將持續(xù)發(fā)展。越來(lái)越多的抗體藥物將會(huì)應(yīng)用到疾病的治療中。尺寸排阻色譜法（SEC）廣泛用于抗體中單體，二聚體，聚集體和片段等的分析和定量中。為實(shí)現(xiàn)更高的分離度和更快的分析時(shí)間，色譜柱生產(chǎn)廠家優(yōu)化了填料顆?；瘜W(xué)和色譜柱填充方法,近年來(lái),2μm和亞2μm粒徑SEC色譜柱相繼問(wèn)世.

通過(guò)這種方法使得一些樣品的分析結(jié)果得到了改善，但由于一些新型抗體藥物具有高度的疏水性，抗體在色譜柱凝膠基質(zhì)上的非特異性吸附使得抗體藥物的分析仍然具有一定的挑戰(zhàn)。在本應(yīng)用指南中，使用TSKgel®UP-SW3000，2μm SEC色譜柱分析單克隆抗體（mAb），并在pH 6.7的磷酸鈉緩沖液中添加15％IPA。如圖所示，峰分離度和保留時(shí)間變化均不受影響。

HPLC實(shí)驗(yàn)條件

色譜柱：TSKgel UP-SW3000，2μm，4.6 mm ID x 30 cm

儀  器：Chromeleon®（7.2版）運(yùn)行的UltiMate®3000 UHPLC系統(tǒng)

流動(dòng)相：100 mmol / L KH2PO4 / Na2HPO4中的15％IPA，pH 6.7，100 mmol / L Na2SO4、0.05％NaN3

流  速：0.30 mL / min

檢  測(cè)：紫外線@ 280 nm

溫  度：30?C

壓  力：22 MPa（最大色譜柱壓力為34 MPa）

進(jìn)樣量：5μL，4 mg / mL

樣  品：USP mAb標(biāo)準(zhǔn)品

 TSKgel UP-SW3000單克隆抗體分析色譜柱

結(jié)果與討論

將USP mAb標(biāo)準(zhǔn)品注射到TSKgel UP-SW3000 4.6 mm ID×30 cm色譜柱上，利用磷酸鈉緩沖液pH 6.7為流動(dòng)相，樣品具有出色的重現(xiàn)性，如圖1所示。該圖顯示了以0.3 mL / min的流速連續(xù)進(jìn)樣14針USP mAb標(biāo)準(zhǔn)樣品，單體，二聚體，聚集體和碎片峰的保留時(shí)間幾乎不變，每次進(jìn)樣的峰寬和峰形非常一致。