蛋白表達(dá)增強(qiáng)型轉(zhuǎn)染試劑技術(shù)參數(shù)

時(shí)間：2013/1/6閱讀：1830

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產(chǎn)品名稱 :

Transfection Reagent for Transient Protein Expression

蛋白表達(dá)增強(qiáng)型轉(zhuǎn)染試劑

品牌 :

BIOMIGA

貨號 :

GT1212-01

規(guī)格 :

0.5mL/1.0mL/1.5mL/6.0mL

詳細(xì)信息 :

說明 :

可用于150次6-孔板或3.5mm培養(yǎng)皿的細(xì)胞轉(zhuǎn)染。

產(chǎn)品說明

GeneTran II是一種新型的脂質(zhì)體和多聚物轉(zhuǎn)染試劑，可用于各種真核細(xì)胞系的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染，如HEK293、CHO、COS、NIH3T3、MCF-7、PC12、RKO、C2C12、鼠胚胎干細(xì)胞和纖維原細(xì)胞、間質(zhì)干細(xì)胞、NCCIT、果蠅細(xì)胞。同時(shí)原代細(xì)胞也能轉(zhuǎn)染，如人腫瘤細(xì)胞、大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞、大鼠和小鼠皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞、肝細(xì)胞等。對于懸浮細(xì)胞也有較高的轉(zhuǎn)染效率和較低的毒性，如HEK 293、小鼠淋巴細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞（sf9, sf21, High-Five）。有無血清存在（0-20％）對轉(zhuǎn)染試劑的效果無影響。

主要特點(diǎn)

轉(zhuǎn)染各種貼壁細(xì)胞。

對胚胎干細(xì)胞和原代細(xì)胞有較高的轉(zhuǎn)染效率。

對懸浮細(xì)胞如HEK293和sf9、sf21、high-five等昆蟲細(xì)胞也有很高的轉(zhuǎn)染效率。

在同類產(chǎn)品中具有更高的轉(zhuǎn)染效率和更低的毒性。

有無血清存在（0-20％）對轉(zhuǎn)染試劑的效果無影響。

可用于單個(gè)質(zhì)?；蚨鄠€(gè)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)。

轉(zhuǎn)染24-72小時(shí)后，有高的蛋白表達(dá)量。

性價(jià)比高

操作簡便

保存條件

GeneTran 可在4℃（切勿放-20℃）至少保存18個(gè)月。使用之前請先將試劑瞬時(shí)離心。

質(zhì)粒轉(zhuǎn)染步驟

以下步驟是用于35mm培養(yǎng)皿或6孔培養(yǎng)板轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞的。若用于其他規(guī)格培養(yǎng)皿的轉(zhuǎn)染，請參考表1的用量。所有的數(shù)據(jù)和體積都是每孔的用量。對于絕大多數(shù)的細(xì)胞系和原代細(xì)胞，質(zhì)粒DNA和GeneTran的比例按1:2-1:3混合。轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞可只按1:1混合。有時(shí)優(yōu)化條件也是必須的（參見質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染條件的優(yōu)化，第7頁）。

A. 轉(zhuǎn)染貼壁細(xì)胞（35 mm培養(yǎng)皿或6孔培養(yǎng)板）

轉(zhuǎn)染前一天鋪板使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞達(dá)到60-70%的匯合度。

1. 對于每一個(gè)轉(zhuǎn)染樣本，按如下比例配制轉(zhuǎn)染混合液：

2.5 μg    質(zhì)粒DNA

5 μL       GeneTran

x μL       無血清DMEM（或其他無血清培養(yǎng)基, PBS, DPBS等）

              總體積100 μL

* 不能在轉(zhuǎn)染混合液中混有Opti-MEM和血清

2. 用槍頭吹打混勻，放置于室溫20-40min。

3. 將混合液加入1 μL Reagent B，混勻后，加入到細(xì)胞培養(yǎng)皿中，晃動培養(yǎng)皿混勻培養(yǎng)液。放入CO₂培養(yǎng)箱。

注：血清濃度對于轉(zhuǎn)染效果無影響，經(jīng)測試高達(dá)20%的胎牛血清濃度也不會對轉(zhuǎn)染效果產(chǎn)生影響。

4. 在轉(zhuǎn)染后的18-48小時(shí)之間，對細(xì)胞進(jìn)行換液。轉(zhuǎn)染18-48小時(shí)之后可檢測基因表達(dá)。如果檢測到蛋白表達(dá)，請?jiān)谵D(zhuǎn)染后4-5天收集培養(yǎng)液。

5. 如果要得到穩(wěn)定細(xì)胞株，請?jiān)谵D(zhuǎn)染24小時(shí)后按1:10傳代培養(yǎng)。

B. 轉(zhuǎn)染懸浮細(xì)胞（35 mm培養(yǎng)皿或6孔培養(yǎng)板）

轉(zhuǎn)染時(shí)保證細(xì)胞超過90%的密度

1. 對于每一個(gè)轉(zhuǎn)染樣本，按如下比例配制轉(zhuǎn)染混合液：

2.5 μg    質(zhì)粒DNA

5 μL       GeneTran

X μL       無血清DMEM（或其他無血清培養(yǎng)基, PBS, DPBS等）

              總體積100 μL

* 不能在轉(zhuǎn)染混合液中混有Opti-MEM和血清

2. 槍頭吹打混勻，放置于室溫20-40分鐘。

3. 將混合液加入1 μL Reagent B，混勻后，加入到細(xì)胞培養(yǎng)皿中，晃動培養(yǎng)皿混勻培養(yǎng)液。放入CO2培養(yǎng)箱。

注：血清濃度對于轉(zhuǎn)染效果無影響，經(jīng)測試高達(dá)20%的胎牛血清濃度也不會對轉(zhuǎn)染效果產(chǎn)生影響。

4. 在轉(zhuǎn)染后的18-48小時(shí)之間，對細(xì)胞進(jìn)行換液。轉(zhuǎn)染18-48小時(shí)之后可檢測基因表達(dá)。如果有蛋白表達(dá)，請?jiān)谵D(zhuǎn)染后4-5天收集培養(yǎng)液。

5. 如果要得到穩(wěn)定細(xì)胞株，請?jiān)谵D(zhuǎn)染24小時(shí)后按1：10傳代培養(yǎng)

表1各種細(xì)胞培養(yǎng)板轉(zhuǎn)染推薦用量

培養(yǎng)皿/板

表面積（cm²）

培養(yǎng)液（mL）

混合液（μL）

質(zhì)粒（μg）

GeneTran

10cm

56

10

500

10

20-30 µL

60mm

21

3

150

3

6-9 µL

35mm

8

2

100

2.5

5-7.5 µL

6孔

9.5

2

100

2.5

5-7.5 µL

12孔

3.8

1

50

1

2-3 µL

24孔

1.9

0.5

25

0.5

1-1.5 µL

48孔

0.95

0.25

12.5

0.25

0.5-0.75 µL

96孔

0.32

0.1

5

0.1

0.2-0.3 µL

質(zhì)粒轉(zhuǎn)染條件優(yōu)化

前面介紹的轉(zhuǎn)染步驟是針對一般比較好轉(zhuǎn)的細(xì)胞。

對于C2C12肌肉細(xì)胞系，F(xiàn)uGENE-6 和Lipofectamine-2000的轉(zhuǎn)染效率不到10%，而GeneTran按照下面的體系轉(zhuǎn)染效率可達(dá)70%：

     6 μg       質(zhì)粒DNA

12-18 μL    GeneTran

        X μL    無血清DMEM（或其他無血清培養(yǎng)基, PBS, DPBS等）

                   總體積100 μL

對于其他細(xì)胞系，可參考以下方法優(yōu)化條件：

A．在35mm培養(yǎng)板中將質(zhì)粒量增加到3μg，4μg和6μg。

B．在35mm培養(yǎng)板中將GeneTran增加到15μL。

C．如果轉(zhuǎn)染效率較高，但死細(xì)胞較多，可降低質(zhì)粒量到1μg或更低。也可以減少孵育時(shí)間到5-24小時(shí)。

D．可按下表優(yōu)化條件：



問題

DNA

GeneTran

細(xì)胞毒性

降到1-2 μg

降到2-3 μL

轉(zhuǎn)染效率低

對于難轉(zhuǎn)的細(xì)胞增加到4μg

增加到>1:4

對于特別難轉(zhuǎn)的細(xì)胞增加到6μg

增加到>1:4

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