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Biozol RNA 提取試劑主要產品說明

時間:2013/1/7閱讀:4709
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備注:本公司銷售的所有產品僅用于生化科研試驗

產品名稱 :
 Biozol RNA 提取試劑
品牌 :
 BIOMIGA
貨號 :
 R1020-01
規(guī)格 :
 100 mL/100 mL×5
詳細信息 :
 
產品簡介
 
Biozol 可從各種真核培養(yǎng)細胞,動物組織,細菌植物和真菌中快速提取總RNA,整個實驗可控制在30分鐘內。通常情況下可單次處理1 x 106個真核細胞,1 x 109 個細菌細胞,100 mg 動物或植物組織。如果你要進行全血RNA提取的話,可以使用本試劑盒,不過我們建議使用EzgeneTM Blood RNA Kit (product # R6411)這個專門設計來用于全血RNA提取的試劑盒,EzgeneTM Blood RNA Kit可以很好的溶血,并去除血紅素,提高RNA的得率。
本試劑盒純化的RNA可用于RT-PCR, Northern 雜交,mRNA純化,體外翻譯等下游實驗。
 
原理
 
細胞或組織經Biozol裂解,試劑中的成分會抑制RNase活性。加入氯仿抽提,裂解液將分為水相和有機相。RNA存在于水相中,用異丙醇處理水相后,經過75%酒精的洗滌,室溫晾干或真空干燥后用DEPC水洗脫就能得到高質量的RNA。
 
貯存條件及其穩(wěn)定性
 
Biozol 試劑保存于4℃。該產品可保證在購買之日起至少24 個月內有效。
 
產品組分
 
Catalog #
R1020-00
R1020-01
R1020-02
Biozol 溶液
10mL
100 mL
100 mL x 5
說明書
1
1
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注:Biozol  溶液包含異硫氰酸胍和苯酚,實驗時請格外小心。
即日起為方便客戶使用,Biozol溶液改為紅色。
 
RNA提取操作步驟
 
真核細胞和組織RNA提取步驟
 
1. 1 mL Biozol 試劑 裂解細胞或組織
1 mL Biozol溶液可以充分裂解107個細胞,或是100mg剪碎的組織(30 mm3)        
對于單層培養(yǎng)細胞(成纖維細胞,內皮細胞等)
按下面的方法在培養(yǎng)瓶中直接裂解細胞:盡量吸干培養(yǎng)基,然后直接將Biozol 溶液加入到培養(yǎng)皿。用裂解液吸打培養(yǎng)皿上面的細胞,使全部細胞都裂解。轉移裂解液到1.5mL的離心管。(這個辦法比用胰酶消化收集細胞好一些,因為這樣可以zui大限度降低RNA酶對RNA的降解。)
對于懸浮培養(yǎng)細胞
用不超過1,500 rpm (400 x g) 離心 5分鐘.棄上清,加入Biozol溶液,漩渦混勻或槍頭吸打混勻。然后轉移到1.5mL離心管。
對于組織樣品
按照樣品的類型,選擇一個較好的勻漿方法。除了液氮研磨以外,其他勻漿方法可直接在Biozol溶液 中操作。其中對于特殊組織樣品如:肝、脾、骨及軟骨等需要將Biozol用量加大一倍或是降低樣品量。
2.  在室溫下,靜置兩分鐘。
3.  每1 mL Biozol 溶液加入0.2倍體積的氯仿(1 mL Biozol Reagent 對應加入0.2 mL 氯仿),蓋好蓋,用手劇烈震蕩15秒。
4.  4oC 下12,000 xg 離心 3 分鐘。溶液分為酚氯仿相、中間相和上層水相。RNA溶解在水相中。
5.  轉移不超過80%的水相到一個干凈的離心管,然后加入0.5倍體積異丙醇(96-100%,室溫),漩渦充分震蕩15秒。
6.  4oC 下12,000 x g 離心 10 分鐘,離心后試管底部將出現沉淀。
7.  RNA沉淀的清洗:沿管壁輕輕加入1mL 75%的乙醇(防止加入乙醇時沖散沉淀),用手輕輕震蕩離心管洗滌沉淀。7500×g離心5分鐘,棄上清,盡量去除殘留乙醇,這樣可以減少鹽離子污染。
8.  重復第7步。
9.  RNA的溶解:室溫晾干或真空干燥,(不要過于干燥,否則RNA很難溶解)然后加入30-50 µL DEPC 溶解RNA,待沉淀*溶解后于-80℃保存。

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